Page 22 - 《中国药房》2026年4期

本的高质量序列与参考基因组进行比对，以差异倍数
（fold change，FC）对数的绝对值（|log2FC|）≥1 且错误发
[9]
现率＜0.05 为标准 筛选差异表达基因（differential ex‐
pressed genes，DEGs）；对所得DEGs（空白对照组vs.模型
组）进行京都基因和基因组数据库（Kyoto Encyclopedia
A.空白对照组 B.模型组 C.阳性对照组
of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析。转录组学
测序工作由上海百趣生物医学科技有限公司协助完成。
2.6.2 实验验证
（1）实时荧光定量 PCR 实验：取空白对照组、模型
组、阳性对照组和QBCS低、中、高剂量组大鼠耳组织样
D. QBCS低剂量组 E. QBCS中剂量组 F. QBCS高剂量组
本适量，采用RNA提取试剂盒提取总RNA，待测定其纯
图1 各组大鼠耳部外观观察
度、浓度后，按照逆转录试剂盒说明书方法将总RNA逆
转录为 cDNA。以此 cDNA 为模板，进行 PCR 扩增。扩 3.2 QBCS对AV大鼠血清炎症因子水平的影响
增体系（共20 μL）包括：SYBR qPCR Master Mix 10 μL， 与空白对照组比较，模型组大鼠血清中 TNF-α、IL-
正、反向引物各 0.4 μL，cDNA 模板 2 μL，双重去离子水 6、IL-1β 水平均显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，各
7.2 μL。反应条件为：95.0 ℃预变性10 min；95.0 ℃变性 药物组大鼠血清中 TNF-α（QBCS 低剂量组除外）、IL-6
10 s，60.0 ℃退火/延伸 30 s，共 40 个循环。采用 2 －ΔΔCt 法 （QBCS 低剂量组除外）、IL-1β 水平均显著降低（P＜
计算各目的基因的相对表达量，结果以空白对照组为参 0.05）。结果见图2。
照进行归一化处理。 20 150 200
（2）Western blot实验：取上述6组大鼠（每组3只）耳 （ pg/mL ） 15 （ pg/mL ） 100 （ pg/mL ） 150
100
10
组织样本适量，加入RIPA裂解液，匀浆后以12 000 r/min TNF-α/ 5 0 IL-6/ 50 0 IL-1β/ 50 0
离心 15 min，取上清蛋白；将蛋白于 95 ℃下充分变性 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ
B. IL-6
A. TNF-α
C. IL-1β
后，经10%SDS-PAGE分离并转移至聚偏二氟乙烯膜上， Ⅰ：空白对照组；Ⅱ：模型组；Ⅲ：阳性对照组；Ⅳ：QBCS低剂量组；
以快速封闭液封闭20 min；洗膜后，加入相应蛋白一抗， Ⅴ：QBCS中剂量组；Ⅵ：QBCS高剂量组；a：与空白对照组比较，P＜
0.05；b：与模型组比较，P＜0.05。
于4 ℃下孵育过夜；洗膜后，加入相应二抗（稀释比例为
图2 各组大鼠血清炎症因子水平比较（x±s，n＝6）
1∶10 000），于室温下孵育 1 h；洗膜后，以 ECL 化学发光
试剂显影、成像。使用Image J软件分析各目的蛋白的条 3.3 QBCS对AV大鼠耳组织病理形态学的影响
带灰度值，以目的蛋白与内参蛋白（β-actin）的条带灰度值 空白对照组大鼠耳组织无明显异常。模型组大鼠
比值表示各目的蛋白的表达水平，以磷酸化蛋白与未磷 耳组织呈现典型的炎症性病理改变，包括表皮显著增
酸化蛋白的表达水平比值表示该蛋白的磷酸化水平。 厚、皮脂腺增生与导管扩张、真皮层结构紊乱、大量炎症
2.7 统计学方法 细胞浸润及毛细血管扩张充血。阳性对照组和 QBCS
采用 GraphPad Prism 8.0 软件对数据进行统计分 高剂量组大鼠耳组织结构的恢复最为显著，其表皮厚度
析。满足正态分布的计量资料以x±s表示，多组间比较 接近正常水平，真-表皮边界清晰，炎症细胞浸润得以大
采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。 幅缓解。QBCS 中剂量组大鼠耳组织表皮厚度适度变
检验水准α＝0.05。 薄，且炎症细胞浸润程度减轻。QBCS 低剂量组大鼠耳
3 结果 组织表皮厚度略有变薄，组织层次稍趋清晰，但仍可见
3.1 QBCS对AV大鼠耳部外观的影响 明显的炎症细胞浸润。结果见图3。
空白对照组大鼠耳部外观无明显异常。模型组大
鼠存在典型的AV病理表现，包括耳廓组织硬化、色泽暗
红、皮肤显著增厚伴有褶皱，同时可在造模区域观察到
明显的皮脂腺导管脱落、弥散性丘疹及脓疱等炎症性皮 A.空白对照组 B.模型组 C.阳性对照组
损以及毛细血管扩张。阳性对照组大鼠耳部皮肤褶皱
及红肿现象基本消失，炎症性皮损部分消退，且毛细血
管扩张状况得到有效缓解。QBCS各剂量组大鼠皮肤增
厚、红斑及炎症性皮损均有所改善，且呈一定的剂量依
D. QBCS低剂量组 E. QBCS中剂量组 F. QBCS高剂量组
赖趋势，但整体改善程度略逊于阳性对照组。结果 黄色箭头：耳组织表皮增厚；绿色箭头：炎症细胞浸润。
见图1。 图3 各组大鼠耳组织病理学改变的显微图（HE染色）

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