Page 21 - 《中国药房》2026年4期

免 疫 吸 附 测 定 试 剂 盒（批 号 分 别 为 A38250142、 2 方法
A30640745、A301B50234）均购自上海联科生物科技有 2.1 痤疮丙酸杆菌菌悬液的制备
限公司；RNA 提取试剂盒、逆转录试剂盒、PCR 试剂盒 取痤疮丙酸杆菌，加入无菌磷酸盐缓冲液 0.5 mL，
（批号分别为Q711-01、R233-01、Q711-02）均购自南京诺 充分重悬后均匀涂抹于哥伦比亚血琼脂平板表面，置于
唯赞生物科技股份有限公司；10%十二烷基硫酸钠-聚丙 37 ℃厌氧培养箱中培养1～2 d。待菌落长成后，收集菌
烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）凝胶快速制备试剂盒（货 体，用无菌生理盐水重悬，并通过麦氏比浊法将菌悬液
7
号 PG112）购自上海雅酶生物医药科技有限公司；兔抗 密度调整至约6×10 cfu/mL，于4 ℃下保存，备用。
NF-κB p65、β-肌动蛋白（β-actin）抗体和辣根过氧化物酶 2.2 分组、造模与给药
将大鼠随机分为空白对照组（n＝6）与造模组（n＝
标记的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（货号分别为14064-
30）。造模组大鼠于双耳内侧近耳道处均匀涂抹油酸
1-AP、20536-1-AP、SA00001-2）均购自武汉三鹰生物有
1.0 mL（区域大小约 1.5 cm×1.5 cm），每天 1 次，连续 3
限公司；兔抗磷酸化 NF-κB p65（phosphorylated NF-κB
d；随后，于双侧耳廓分别皮下注射痤疮丙酸杆菌菌悬液
p65，p-NF-κB p65）、MyD88 抗体（货号分别为 AF2006、
50 μL，每天1次，连续14 d。若造模部位出现红肿，肉眼
AF5195）均购自江苏亲科生物研究中心有限公司；兔抗
可见毛细血管扩张、脱屑及丘疹样隆起或囊肿等症状，
TLR2抗体（货号bs-1019R）购自北京博奥森生物技术有
[8]
则表明大鼠AV模型构建成功 。
限公司；哥伦比亚血琼脂平板（批号 CP0910）购自广东
将造模成功的大鼠随机分为模型组、阳性对照组和
环凯微生物科技有限公司；TNF-α、TLR2、γ 干扰素（in‐
QBCS低、中、高剂量组，每组6只。自分组当日起，于各
terferon-γ，IFN-γ）、CXC 趋化因子配体 8（CXC chemo‐ 药物组大鼠造模区域均匀涂抹相应药液，每天1次，连续
kine ligand 8，CXCL8）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ 14 d。参照体表面积等效剂量换算方法并结合临床用
（peroxisome-proliferator-activated receptor gamma，PPARG）、 量，将QBCS低、中、高剂量分别设为3.55、7.11、14.22 g/kg
肿瘤蛋白 53（tumor protein 53，TP53）PCR 引物（具体序 （以生药量计，相当于临床等效剂量的1/2、1、2倍），将阳
列及产物长度见表 1）由生工生物工程（上海）股份有限 性对照药维 A 酸乳膏剂量设为 0.045 g/kg（与临床等效
公司设计、完成。 剂量相当）。空白对照组和模型组大鼠于耳部相同区域
表1 PCR引物序列及产物长度 均匀涂抹生理盐水（体积同QBCS中剂量组），每天1次，
目的基因 引物序列（5′→3′） 产物长度/bp 连续14 d。
TNF-α 正向：ATGGGCTCCCTCTCATCAGTTCC 114 2.3 大鼠耳部外观形态观察
反向：GCTCCTCCGCTTGGTGGTTTG 末次给药后，观察各组大鼠的耳部外观形态。
TLR2 正向：AGTACAGGGATACAGGCCGT 109
反向：CTTGGAGCCGAGGCAAAAAC 2.4 大鼠血清中炎症因子水平检测
PPARG 正向：GAACGTGAAGCCCATCGAGGAC 107 耳部外观观察结束后，将各组大鼠以戊巴比妥钠麻
反向：GGAGCACCTTGGCGAACAGC 醉，取腹主动脉血；血样于室温下静置 2 h 后以 3 000
TP53 正向：GTACCGATGGTATGAGCCACCTGAGG 120 r/min 离心 15 min，分离上层血清。取血清样本适量，使
反向：CAGCGTGATGATGGTAAGGATGG
IFN-γ 正向：CATGAGCATCGCCAAGTTCG 130 用多功能酶标仪于双波长（检测波长 450 nm，参考波长
反向：TCAGCACCGACTCCTTTTCC 630 nm）下检测血清中TNF-α、IL-6、IL-1β水平。严格参
CXCL8 正向：GAGACTTCCAGCCAGTTGCCTTC 114 照相应试剂盒说明书操作。
反向：CTGGTCTGTTGTGGGTGGTATCC 2.5 大鼠耳组织病理形态学观察
β-actin 正向：TGAGGCTGGTGATAAATGG 119
反向：CAAAGAGGGCAAGAACACA 采血后，将各组大鼠处死，分离其耳组织适量，于
4 ℃、4%多聚甲醛溶液中固定24 h，经梯度乙醇脱水、二
1.3 实验动物
甲苯透明、石蜡包埋后切片（厚度约 4 μm）；取切片，行
4～6 周龄的 SPF 级雄性 SD 大鼠 36 只，体重（200±
苏木精-伊红（HE）染色，使用光学显微镜观察各组大鼠
20）g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物
耳组织的病理形态学变化。
生产许可证为 SCXK（京）2021-0001。所有动物均饲养
2.6 大鼠耳组织转录组学研究与实验验证
于南京中医药大学实验动物中心标准环境[室温 22～ 2.6.1 转录组学研究
24 ℃，相对湿度（55±5）%，自然光照循环]下。本实验 取空白对照组、模型组、QBCS中剂量组大鼠耳组织
方案已获得南京中医药大学实验动物伦理委员会审批 样本，使用 RNA 提取试剂盒提取总 RNA，待测定其纯
（申请号 202409A089），实验过程严格遵循实验动物伦 度、浓度、完整性后，以 Oligo（dT）磁珠富集 mRNA 并将
理及福利相关要求。 其打断，以片段化的 mRNA 作为模板，合成 cDNA 的第
1.4 菌株 一链和第二链；对所得双链cDNA进行纯化、末端修复、
痤疮丙酸杆菌标准菌株BWCC67025购自河南标准 测序接头连接后，构建cDNA文库，上机测序；将所得原
物质研发中心。 始测序数据经质控过滤后，获取高质量序列。将各组样

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