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2 方法                                               691161211、691171210、691180701)、注射用硫酸长春新
          2.1 血样采集及 DNA提取                                    碱[深圳万乐药业有限公司,国药准字 H44021772,规格
              因多项药代动力学研究表明,利妥昔单抗的ctrough与                    1 mg(按 C46H56N4O10 ·H2SO4 计),批号分别为 1706V2、
          药-时曲线下面积(area under the curve,AUC)显著相              1809V1、1810V1]、醋酸泼尼松片(天津力生制药股份有
          关 [10―11] ,且文献推荐检测第 1 个疗程的 ctrough进行预后分            限公司,国药准字 H12020689,规格 5 mg,批号分别为
            [12]
          析 ,故本研究检测了第1个疗程利妥昔单抗的ctrough,即                     CP180511A、CP190602A、CP190615A)、利 妥 昔 单 抗
          在第2个疗程给药前采集患者血样2 mL,用乙二胺四乙                         ELISA试剂盒(美国BioVision公司)。
          酸抗凝管收集。所有血样采集后于6 h内以5 000 r/min                    2.4 临床治疗方法
          离心10 min,分离出血浆和血细胞,将血浆冻存于-80 ℃                         登记入组患者确诊时及治疗过程中的身高、体重、
          超低温冰箱,3个月内完成血药浓度检测;剩余血细胞按                          合并用药情况、一般健康状态、生化指标、血常规指标等
                  ®
          TIANamp 血液 DNA 试剂盒[天根生化科技(北京)有限                    资料。患者根据病情并遵照《中国恶性淋巴瘤诊疗规范
          公司]说明书操作提取 DNA,于-80 ℃超低温冰箱冻                       (2015 年版)》 ,接受 4~6 个疗程 R-CHOP 方案治疗,每
                                                                         [9]
          存,用于后续基因型检测。
                                                             21 d 为 1 个疗程。R-CHOP 化疗方案的用法用量为:利
          2.2 基因型检测
                                                             妥昔单抗375 mg/m 缓慢静脉注射、环磷酰胺 750 mg/m              2
                                                                              2
              采用 Haploview 4.2 软件挑选 MS4A1 基因 tagSNP:
                                                             静脉注射、多柔比星 50 mg/m(或多柔比星脂质体 20
                                                                                       2
          rs1051461、rs17155034、rs4939364、rs10501385;取“2.1”
                                                                  2
                                                             mg/m)静脉注射、长春新碱 2 mg 静脉注射,第1~5天;
          项下血样分离后的冻存血细胞,以基质辅助激光解吸电
                                                             另每天口服泼尼松 100 mg,每21 d为1个疗程。一般达
          离-飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ioniza‐
                                                             到完全缓解后巩固2个疗程,共进行6~8个疗程。若期
          tion time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)
                                                             间发生肿瘤进展或控制不佳,则更换其他化疗方案,视
          法进行基因型检测。首先采用 Assay Designer 3.1 软件
                                                             为患者出组。
          设计PCR引物并进行PCR扩增,然后进行虾碱性磷酸酶
                                                             2.5 疗效评价
          消化反应和单碱基延伸反应,最后采用 MALDI-TOF-
                                                                 在患者治疗结束后,每 3 个月对其进行 1 次电话随
          MS法,以Typer 4.0软件检测质谱峰,根据质谱峰图判读
                                                             访,建立电子管理档案,随访日期截至 2024 年 12 月 31
          各样本目标位点的基因型。
                                                             日。在随访期内,基于患者的 PFS 和 OS 绘制生存曲线
          2.3 利妥昔单抗血药浓度检测
                                                            (PFS是指患者从接受治疗至观察到疾病进展或因任何
              采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosor‐
                                                             原因死亡之间的时间;OS 是指从随机化分组开始至因
                          [11]
          bent assay,ELISA) 检测利妥昔单抗血药浓度。取
                                                             任何原因死亡或到随访截止的时间),探讨 MS4A1 基因
         “2.1”项下冻存血浆,通过建立“捕捉抗体-利妥昔单抗-
                                                             多态性与利妥昔单抗疗效的相关性。
          检测抗体”的夹心法进行血药浓度定量。方法的特异
                                                             2.6 统计学处理
          性、选择性、准确度、精密度、稀释线性、稀释平行性、样
                                                                 应用SPSS 24.0软件对数据进行统计分析。采用单
          品稳定性均符合要求。
                                                             因素线性回归分析患者人口统计学(性别、年龄、体重
              所用仪器、药品及试剂有:Veriti 梯度 PCR 仪(美国
                                                             等)、临床指标、基因型与第 1 个疗程利妥昔单抗稳态
          ABI 公司)、DNA 质谱阵列基因分析系统(美国 Agena
          Bioscience 公司)、酶标仪/全波长读数仪(美国 Thermo                ctrough的相关性;再将有统计学意义(P<0.05)的因素作为
          Fisher Scientific 公司)、利妥昔单抗注射液(瑞士 Roche            自变量,第 1 个疗程利妥昔单抗稳态 ctrough作为因变量进
          Pharma Ltd 公司,国药准字 J20170034,规格 100 mg/10          行多元线性回归分析。绘制 Kaplan-Meier 曲线以评估
          mL,批号分别为 H0224/SH0123、H0242/SH0132、H0235/          患者的PFS和OS。以MS4A1基因型和肿瘤分期为自变
          SH0129)、注射用环磷酰胺(德国Baxter Oncology GmbH             量,采用 Cox 回归模型评估影响患者预后的因素,数据
          公司,国药准字 H20160467,规格 0.2 g,批号分别为                   以风险比(hazard ratio,HR)及其 95% 置信区间(confi‐
          7F167A、7F172A、8A210A)、注射用盐酸多柔比星(瀚晖                 dence interval,CI)表示。
          制药有限公司,国药准字 H33021980,规格 10 mg,批号                      符合正态分布的计量资料以x±s表示,多组间比较
          分别为18007113、18019811、1900611)、盐酸多柔比星脂              采用方差分析,进一步两两比较采用t检验;偏态分布的
          质体注射液(石药集团欧意药业有限公司,国药准字                            计量资料以M(P25,P75 )表示,使用非参数检验。计数资料
                                                                                     2
          H20113320,规 格 为 10  mL∶20  mg,批 号 分 别 为            用频数或率(%)表示,采用χ 检验。检验水准α=0.05。

          中国药房  2025年第36卷第13期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 13    · 1643 ·
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