Page 33 - 《中国药房》2024年5期

2 mL/孔），于细胞培养箱中常规培养。按“2.4.2”项下方 10 10
a a
法分组（其中给药组设低、中、高浓度，分别为 0.156、 8 8 c b
0.313、0.625 μmol/L，浓度根据“2.4.1”项下实验结果确 （ μmol/L ） 6 b c （ μmol/L ） 6 b
定；每组设3个复孔）、处理、培养。收集细胞进行总蛋白 4
提取，用 BCA 法测定总蛋白浓度，将蛋白变性后在 150 NO含量/ b NO含量/ 4
V 恒压条件下进行 8% 烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电 2 2
泳，随后在恒流400 mA条件下转膜45 min，室温封闭45 0 0
min；加入 PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、caspase-3、Bax、Bcl- 对照组 模型组 Cel 0.039 μmol/L组 Cel 0.078 μmol/L组 Cel 0.156 μmol/L组 Cel 0.313 μmol/L组 Cel 0.625 μmol/L组 对照组 模型组 Cel-1 0.039 μmol/L组 Cel-1 0.078 μmol/L组 Cel-1 0.156 μmol/L组 Cel-1 0.313 μmol/L组 Cel-1 0.625 μmol/L组
2、β-actin一抗（β-actin的稀释比为1∶200，其余一抗的稀
A. Cel B. Cel-1
释比均为1∶1 000），4 ℃孵育过夜；TBST洗膜后，加入对 10
应的二抗（稀释比均为 1∶2 000），室温孵育 1.5 h；TBST 8 a
洗膜后，滴加 ECL 化学发光显影液，在凝胶成像系统上 （ μmol/L ） 6 c c
进行曝光，采用 Image J 软件分析各条带的灰度值。以 b
各目标蛋白与内参蛋白（β-actin）条带灰度值的比值表示 NO含量/ 4 b
目标蛋白的表达水平，用磷酸化与对应未磷酸化蛋白表 2
达水平的比值表示该蛋白的磷酸化水平，计算Bcl-2/Bax 0
比值。 对照组 模型组 Cel-2 0.039 μmol/L组 Cel-2 0.078 μmol/L组 Cel-2 0.156 μmol/L组 Cel-2 0.313 μmol/L组 Cel-2 0.625 μmol/L组
2.6 统计学方法
C. Cel-2
利用 SPSS 26.0 软件进行统计学分析，采用 Graph‐ a：与对照组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01；c：与模型组
Pad Prism 8.0.1软件制作统计柱形图。数据均以x±s表 比较，P＜0.05。
示，多组间比较采用单因素方差分析，方差齐时组间两 图2 各组细胞培养液中NO含量测定结果（x±s，n＝4）
两比较采用 LSD-t 检验，方差不齐时组间两两比较采用
及其衍生物的不同浓度组细胞培养液中上述指标水平
Games Howell检验。检验水准α＝0.05。
均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），并呈现出浓度依赖性
3 结果
趋势。结果见表1。
3.1 抗神经炎症活性研究结果
3.1.1 Cel及其衍生物对BV2细胞毒性的影响结果 表1 各组细胞培养液中 TNF-α、IL-1β 及 IL-6 含量的
1.25～20 μmol/L Cel 及其衍生物作用后 BV2 细胞 测定结果（x±s，n＝3，pg/mL）
的存活率显著下降，提示其存在细胞毒性。Cel、Cel-1、 组别 TNF-α IL-1β IL-6
Cel-2 对 BV2 细胞的 IC50 分别为（1.14±0.08）、（3.14± 对照组 566.57±36.33 37.21±4.52 82.62±1.83
模型组 1 989.78±45.12 a 178.92±14.51 a 199.53±17.81 a
0.24）、（1.58±0.10） μmol/L（n＝5）。可见，Cel-2 对 BV2
Cel 0.156 μmol/L组 1 183.92±40.83 b 124.45±6.18 b 155.79±5.47 b
细胞的毒性作用较 Cel小。为了消除 Cel及其衍生物的 Cel 0.313 μmol/L组 1 009.26±41.84 b 95.02±0.79 b 142.99±1.49 c
毒性干扰，后续实验选择对细胞生长无显著影响的药物 Cel 0.625 μmol/L组 910.61±33.63 c 87.47±0.64 b 131.59±4.31 c
浓度（0.625、0.313、0.156、0.078、0.039 μmol/L）来评估其 Cel-1 0.156 μmol/L组 1 618.51±67.12 b 134.59±4.40 b 177.07±10.07 b
Cel-1 0.313 μmol/L组 1 274.94±84.38 c 121.24±4.62 b 150.63±4.50 c
抗神经炎症活性。
Cel-1 0.625 μmol/L组 1 027.70±60.59 c 101.68±4.56 b 130.64±4.64 c
3.1.2 Cel 及其衍生物对 LPS 诱导 BV2 细胞培养液中 Cel-2 0.156 μmol/L组 1 163.53±25.53 b 108.67±8.55 b 155.88±3.71 b
NO含量的影响结果 Cel-2 0.313 μmol/L组 1 053.53±52.51 c 94.81±4.33 b 145.82±6.19 c
与对照组比较，模型组BV2细胞培养液中NO 含量 Cel-2 0.625 μmol/L组 914.81±51.33 c 79.74±3.59 b 121.22±9.35 c
均显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，Cel及其衍生物 a：与对照组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与模型组
的 0.156、0.313、0.625 μmol/L 组细胞培养液中 NO 含量 比较，P＜0.01。
均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）。Cel、Cel-1、Cel-2 对 3.2 抗氧化损伤活性的研究结果
神 经 炎 症 的 IC50 分 别 为（0.25±0.04）、（0.61±0.14）、
3.2.1 Cel 及其衍生物对 SH-SY5Y 细胞毒性的影响
（0.11±0.02） μmol/L（n＝4）。可见，Cel-2抑制神经炎的
结果
作用效果最优。结果见图2。
1.25～20 μmol/L 的 Cel 及 其 衍 生 物 作 用 后 SH-
3.1.3 Cel及其衍生物对BV2细胞培养液中TNF-α、IL-
1β及IL-6含量的影响结果 SY5Y 细胞的存活率显著下降，提示其存在细胞毒性。
Cel、Cel-1、Cel-2 对 细 胞 的 IC50 分 别 为（1.30±0.09）、
与对照组比较，模型组细胞培养液中 TNF-α、IL-1β
及 IL-6 含量均显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，Cel （3.90±0.16）、（1.42±0.10） μmol/L（n＝5）。为了消除

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