Page 31 - 《中国药房》2024年5期

protein expressions of caspase-3 and Bax were decreased significantly （P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS Cel， Cel-1， and
Cel-2 all have significant neuroprotective activities at certain concentrations， and Cel-2 shows the most significant protective effect.
The mechanism of action of Cel-2 may be related to regulating the PI3K/Akt and caspase-3/Bcl-2/Bax signaling pathways， reducing
the inflammatory response， oxidative stress damage and inhibiting neuronal apoptosis.
KEYWORDS celastrol； derivatives； neuroprotective； neuroinflammation； oxidative stress

神经退行性疾病是指由于神经细胞或其髓鞘的丧 1 材料
失导致人体出现功能障碍的中枢神经系统疾病，神经炎 1.1 主要仪器
症、氧化应激、细胞凋亡、兴奋性神经毒素等被认为是诱 本研究所用的主要仪器包括REVCO型CO2培养箱
导该病发生的重要原因 [1―2] 。目前临床上仍然缺乏治疗 （美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、Infinite M200 Pro
此类疾病的方法，开发新型、高效、低毒的神经保护药物 型多功能酶标仪（德国 Tecan 公司）、ECLIPSE TS100-F
迫在眉睫。天然产物具有丰富的药理活性，从中筛选出
型光学显微镜（日本Nikon公司）、WIX-easyPR04型基础
疗效确切、安全无毒的防治神经退行性疾病的候选药物
电泳仪[韦克斯科技（北京）有限公司]、ChemiDocXRS+
具有得天独厚的优势。
型凝胶成像分析系统（美国 Bio-Rad 公司）、ZR0Q01600
雷公藤红素（celastrol，Cel）是卫矛科植物雷公藤
型超纯水机（美国Millipore公司）。
Tripterygiam wilfordil Hook.F. 的有效成分之一，具有抗
1.2 主要药品与试剂
[4]
[3]
炎、抗肿瘤、神经保护等多种药理活性 。Liu等 研究表
Cel 对照品（批号 111946-201501，纯度＞98%）购自
明，Cel在治疗神经退行性疾病中，主要通过增加抗氧化
中 国 食 品 药 品 检 定 研 究 院 ；Cel-1、Cel-2（批 号 均 为
应激能力、抑制促炎细胞因子及激活神经胶质来减少神
20220820，纯度均大于 98%）均由本课题组前期自制；
经炎症反应、预防神经元损伤，从而发挥神经保护作用。
但由于 Cel 存在治疗窗窄、生物利用度低和潜在的毒副 LPS（批号L2880，纯度≥99%）购自北京兰博利德生物技
作用等问题，研究者们多对其进行结构修饰来获取效果 术有限公司；DMEM 高糖培养基、胎牛血清、青链霉素
[5]
更好、毒性更小的候选化合物 。本课题组前期基于生 （批号分别为 C3113-0500、C04001-500、C3420-0100）均
物转化技术对 Cel 进行了结构修饰，即利用橄榄链霉菌 购自上海逍鹏生物科技有限公司；MEM/F12 基础培养
CICC 23628转化Cel得到了2个新型Cel衍生物——30- 基（批号 PM151220）购自武汉普诺赛生物科技有限公
羟基-雷公藤红素（Cel-1）和 3，20β，30-trihydroxy-24，29- 司；CCK-8细胞活力试剂盒、ECL发光液试剂盒（批号分
[6]
dinor-1（10），3，5，7-friedelatetraen-2-one（Cel-2）（结构 别为 MA0218-3、MA0186-1）均购自大连美伦生物技术
式见图1），其神经保护作用尚未见报道。 有限公司；一氧化氮（NO）试剂盒、BCA蛋白定量分析试
剂盒（批号分别为 S0021S、P0010）均购自上海碧云天生
物技术有限公司；白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）、IL-
1β、肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）酶
联免疫吸附检测（ELISA）试剂盒（批号分别为 MM-
Cel Cel-1 Cel-2
图1 基于生物转化制备的Cel衍生物Cel-1和Cel-2 0132M1、MM-0163M1、MM-0040M1）均购自江苏酶免
实业有限公司；鼠源 β-肌动蛋白（β-actin）抗体（批号
神经炎症和氧化应激在神经退行性疾病中发挥重
K1716）购自美国 Santa Cruz 公司；兔源磷脂酰肌醇 3 激
要作用。脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）是革兰氏阴性
酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）、蛋白激酶 B（pro‐
菌内毒素成分，可诱导小鼠小胶质BV2细胞释放一系列
tein kinase B，Akt）、B 淋巴细胞瘤 2（B-cell lymphoma 2，
的炎症因子，表现出严重的神经炎症反应 [7―8] 。过氧化
Bcl-2）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl-2 associated X protein，
氢（H2O2 ）是一种主要活性氧，可通过内、外途径诱导人
Bax）抗体（货号分别为 20584-1-AP、10176-2、26593-1-
神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞凋亡，被广泛用于神经细
胞损伤或神经细胞死亡的评估中 [9―10] 。基于此，本研究 AP、50599-2-lg）均购自武汉三鹰生物技术有限公司；兔
在前期研究基础上，分别采用LPS诱导构建小胶质BV2 源胱天蛋白酶3（caspase-3）、磷酸化Akt（p-Akt）（Ser473）
细胞神经炎症模型和H2O2诱导构建SH-SY5Y细胞氧化 抗体、辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标
损伤模型，从神经炎症和氧化应激 2 个方面比较 Cel 及 记的山羊抗鼠 IgG 二抗、HRP 标记的山羊抗兔 IgG 二抗
其衍生物Cel-1、Cel-2的神经保护活性，并进一步阐明活 （货号分别为 9662S、4060S、7076S、7074S）均购自美国
性候选化合物的可能作用机制，以期为基于 Cel 衍生物 CST公司；兔源磷酸化PI3K（p-PI3K）（S2448）抗体（货号
的神经保护药物研究和应用提供依据。 Ab182651）购自美国Abcam公司。

中国药房 2024年第35卷第5期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 5 · 537 ·