Page 37 - 《中国药房》2024年5期
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of  transplanted  tumor  of  colorectal  cancer  in  nude  mice，  the  mechanism  of  which  may  be  associated  with  reducing  inflammatory
          response， inhibiting TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway， and promoting apoptosis in colorectal cancer cells.
          KEYWORDS    total flavonoids from Melicope pteleifolia； colorectal cancer； inflammation； TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway；
          cell apoptosis


              大肠癌（colorectal cancer，CRC）是消化系统最常见             Hartley的干燥茎；5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）注射
                                                       [1]
          的恶性肿瘤之一，我国 CRC 发病率呈逐年上升趋势 。                        液（批号 2202171，规格 10 mL/支）购自天津金耀药业有
          研究发现，慢性炎症是CRC发展的关键因素，对CRC的                         限公司；羧甲基纤维素钠（CMC-Na，批号C8620）购自北
                                [2]
          诱发和恶化具有重要影响 。Toll样受体/髓样分化因子                        京索莱宝科技有限公司；高糖DMEM细胞培养基（批号
          88/核因子 κB（Toll-like receptors/myeloid differentiation   C11995500BT）购自美国 Gibco 公司；胎牛血清（批号
          factor 88/nuclear factor-κB，TLRs/MyD88/NF-κB）信号通   22060043）购自以色列 BI 公司；白细胞介素 6（interleu‐
          路的异常激活可引发持续性的炎症，从而刺激机体释放                           kin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，
                                     [3]
          炎症介质和细胞因子，诱发CRC 。                                  TNF-α）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号分别为
              目前，CRC主要是采用手术、放化疗、靶向治疗及免                       EMC004、EMC102a）均购自武汉伊莱瑞特生物科技有限
          疫治疗等进行干预，但是这些治疗手段具有不良反应                            公司；化学发光检测试剂盒、RIPA 裂解液（批号分别为
                                            [4]
          大、药物特异性低、容易发生炎症等缺点 。中医药在肿                          30330、01408）均购自江苏康为世纪生物科技股份有限
                                      [5]
          瘤综合治疗中具有减毒增效作用 ，可改善患者临床症                           公司；兔源胱天蛋白酶3（caspase-3，批号10008229）购自
          状、延长患者生存期，是肿瘤药物治疗的重要选择。三                           美国 Proteintech 公司；兔源 TNF 受体相关蛋白 6（TNF
          叉苦又称为三丫苦等，为芸香科吴茱萸属植物三叉苦                            receptor-associated  factor  6，TRAF6）、NF- κB 亚 基 p65
          Melicope pteleifolia（champ.ex Benth.）T.G.Hartley的干燥  （NF-κB p65）抗体和鼠源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）
          茎，主要分布于广东、广西、贵州和云南等区域，具有清                          抗 体（ 批 号 分 别 为 GR1006236-2、GR3422076-12、
          热解毒、行气止痛的功效，是银菊感冒片、三九胃泰等中                          GR3316865-24）均购自英国 Abcam 公司；兔源白细胞介
          成药的组方药物之一，主要化学成分为黄酮、生物碱                            素 1 受 体 关 联 激 酶 1（interleukin-1  receptor  associated
          等 ，具有抗肿瘤、抑菌、抗炎、镇痛、抗脓毒症等药理作                         kinase 1，IRAK-1）、TLR4 抗体（批号分别为 20230310、
            [6]
          用 。相关研究发现，三叉苦粗提取物对乳腺癌细胞                            20230310）均 购 自 北 京 兰 杰 柯 科 技 有 限 公 司 ；兔 源
            [7]
         （HCC1937、MDA-MB-231）、结肠癌细胞（HCT116）以及                MyD88 抗体（批号 51f3612）购自美国 Affnity 公司；苏木
          肝癌细胞（HepG2）等均有抑制作用 ，但其是否可抑制                        素染液（批号G1005-1）购自湖北赛维尔生物科技有限公
                                        [8]
          CRC 尚不明确，且具体有效成分为何也仍需进一步探                          司；免疫组化检测试剂盒（批号 CW2069）购自康为世纪
          究。研究发现，黄酮类化合物抗肿瘤作用突出，其可与                           生物科技股份有限公司。
          NF-κB 结合，抑制 NF-κB 活性，从而达到抑制肿瘤细胞                    1.3 细胞株
                    [9]
          增殖的作用 。为此，本研究基于 TLRs/MyD88/NF-κB                       人 CRC 细胞 LoVo 购自浙江美森细胞科技有限公
          信号通路，以三叉苦总黄酮为研究对象，探讨其对裸鼠                           司。采用含 1% 双抗和 10% 胎牛血清的高糖 DMEM 细
          CRC移植瘤的抑制作用及机制，以期为三叉苦抗肿瘤的                          胞培养基在 37 ℃、5%CO2条件下培养 LoVo 细胞，选取
          临床应用和药物开发提供参考依据。                                   对数生长期的细胞用于后续实验。
          1 材料                                               1.4 实验动物
          1.1 主要仪器                                               本研究所用动物为SPF级雄性Balb/c-nu裸鼠，共30
              UV-6000PC 型紫外-可见分光光度计购自上海元析                    只，体重（20±2） g，4～5 周龄，购自斯贝福（北京）生物
          仪器有限公司；AUW-220D型万分之一电子天平购自美                        技术有限公司，实验动物生产许可证号为 SCXK（京）-
          国Costar公司；DM1000型生物显微镜购自德国Leica公                   2019-0010。裸鼠饲养在贵州中医药大学动物中心 SPF
          司；ZS-2 型酶标仪购自北京新风机电技术公司；4600SF                     级动物房内，饲养期间自由饮食。所有动物实验操作均
          型凝胶成像仪购自上海天能生命科学有限公司；Mini                          符合贵州中医药大学动物实验福利伦理审查委员会标
          Trans-Blot 型蛋白转印系统购自美国 Bio-Rad 公司 ；                准，实验动物伦理号为20220095。
          CX23 型光学显微镜购自济南博坤科学仪器有限公司；                         2 方法
          RS-25S型超声波细胞粉碎机购自宁波荣顺科技仪器厂。                        2.1 三叉苦总黄酮的制备
          1.2 主要药品和试剂                                            参考文献方法进行制备           [10―11] ：将 1.1 kg 三叉苦粉碎
              三叉苦药材购自贵阳市中药批发市场，经贵州中医                         过60目筛，精确称取药粉样品适量，采用石油醚按料液
          药大学第一附属医院药剂科罗君教授鉴定为芸香科吴                            比 1∶10（g/mL）在 65 ℃下回流 1 h，用蒸馏水洗脱 2 次；
          茱萸属植物三叉苦M. pteleifolia （champ.ex Benth.） T.G.      过滤，取滤渣，按料液比 1∶30（g/mL）加入 50% 乙醇，在


          中国药房  2024年第35卷第5期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 5    · 543 ·
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