Page 81 - 《中国药房》2024年2期
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尿毒症（uremia，URE）是慢性肾脏病的终末阶段，也                   ELISA试剂盒（货号分别为ml077384、ml059387）均购自
          是急性肾损伤发展的最后状态。急性肾损伤若不及时                            上海酶联生物科技有限公司；兔抗p38 MAPK单克隆抗
          有效地治疗，随着疾病的进展会出现恶化或延迟，进而                           体和兔抗磷酸化 p38 MAPK（p-p38 MAPK）多克隆抗体
          发展为慢性肾功能不全、肾功能衰竭，最终发展为URE。                        （货号分别为 AF7668、AF5887）均购自上海碧云天生物
              管花肉苁蓉是一种具有肝、肾、肠保护作用的植物，                        技术有限公司；小鼠抗 E-上皮钙黏素（E-cadherin）单克
          松果菊苷（echinacoside，ECH）是其主要活性成分，具有                  隆抗体、兔抗 α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle pro‐
          抗氧化、抗炎、抗神经毒素、抗细胞凋亡和保护神经等多                          tein，α-SMA）单克隆抗体、兔抗NF-κB p65多克隆抗体、
                      [1]
          种生物学效应 。目前 ECH 在临床上的应用尚未见报                         兔抗磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）单克隆抗体、兔抗
          道，但有研究显示 ECH 可通过降低 URE 大鼠血清中白                      β-actin 多克隆抗体和山羊抗兔 IgG 二抗（货号分别为
          细胞介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）和 IL-18 的含量，改         ab231303、ab124964、ab19870、ab76302、ab8227、ab6721）
                    [2]
          善其肾功能 ；ECH可修复免疫系统动态平衡、抑制炎症                         均购自英国Abcam公司。
          反应、保护肾功能，改善脓毒症大鼠急性肾损伤 。ECH                         1.3 动物
                                                  [3]
          还能够通过抑制核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信                 SPF级SD大鼠，雄性，体重200～220 g，购自湖北贝
                                                       [4]
          号通路来抑制下游炎症因子的产生，减轻炎症反应 。                           恩特生物科技有限公司，实验动物生产许可证号SCXK
          p38 丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein
                                                            （鄂）2021-0027。本研究方案符合实验动物伦理学要
          kinase，p38 MAPK）是 NF-κB 上游的信号通路，抑制 p38
                                                             求，经武汉华联科生物技术有限公司伦理委员会审核批
          MAPK/NF-κB信号通路的激活能减轻5/6肾切除大鼠炎
                                                             准，批件号HLK-202304-03。
                        [5]
          症反应和肾损伤 。基于此，本文研究了ECH对URE大
                                                             2 方法
          鼠肾损伤和p38 MAPK/NF-κB信号通路的影响，初步探
                                                             2.1 URE大鼠模型建立
          讨其作用机制，旨在为URE的治疗提供参考。
                                                                 大鼠在适宜的温度和湿度环境下，自由饮食饮水，
          1 材料
                                                             适应性喂养 7 d。根据参考文献方法 ，利用 5/6 肾切除
                                                                                             [6]
          1.1 主要仪器
                                                             法建立 URE 大鼠模型：用 3% 戊巴比妥钠麻醉大鼠，背
              本研究所用主要仪器包括 JIDI-20D 型台式多用途
                                                             部剃毛消毒，左侧背部处切口，暴露肾脏，分离肾组织，
          高速离心机（广州吉迪仪器有限公司）、HBS-1096A型酶
                                                             解剖肾包膜，切除肾脏上、下极部位约 2/3 的左肾，止血
          标仪（南京德铁实验设备有限公司）、BX53M 型光学显
                                                             复位缝合伤口；1周后，再次打开切口完全切除右肾。以
          微镜[仪景通光学科技（上海）有限公司]、LSM 900 型共
                                                             仅切开大鼠左侧背部，暴露肾脏，但不摘除肾脏的大鼠
          聚 焦 显 微 镜（北 京 普 瑞 赛 司 仪 器 有 限 公 司）、Mini-
                                                             作为假手术组（Sham 组）。术后 8 周，检测 Sham 组和
          PROTEAN Tetra Cell 型电泳仪[迪图（上海）生物科技有
                                                             URE 大鼠血清中 BUN 和 Scr 水平，如果 URE 大鼠血清
          限公司]、Tanon MINI Space系列多功能凝胶图像分析系
                                                             中BUN、Scr水平为Sham组的2～3倍，则表示URE大鼠
          统（上海天能生命科学有限公司）。
                                                             模型建立成功。
          1.2 主要药品与试剂
                                                             2.2 分组与给药
              ECH（货号 HY-N0020，纯度 99.65%）和茴香霉素
                                                                 将建模成功的URE大鼠分为尿毒症（URE）组、ECH
         （p38  MAPK 信 号 通 路 激 活 剂 ，货 号 HY-18982，纯 度
          99.44%）均购自美国 MCE 公司；肿瘤坏死因子 α（tumor                 低剂量（ECH-L）组、ECH 中剂量（ECH-M）组、ECH 高剂
          necrosis factor-α，TNF-α）、IL-1β、IL-6 酶联免疫吸附测        量（ECH-H）组和 ECH 高剂量+茴香霉素（ECH-H+Ani）
          定（ELISA）试剂盒（货号分别为J22405、J22380、J22434）             组，每组 12 只。ECH-L、ECH-M、ECH-H 组大鼠分别灌
                                                                                     [2]
          均购自武汉吉立德生物科技有限公司；血尿素氮（blood                        胃 10、20、40 mg/（kg·d）ECH ；ECH-H+Ani 组大鼠灌胃
          urea nitrogen，BUN）、β2-微球蛋白（β2-microglobulin，       40  mg/（kg·d）ECH，尾 静 脉 注 射 2  mg/（kg·d）茴 香 霉
                                                               [7]
          β2-MG）、血肌酐（serum creatinine，Scr）、24 h 尿蛋白（24       素 ；Sham 组和 URE 组大鼠灌胃等体积生理盐水，每天
          h urine protein，24 h UP）、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋             1次，连续给药8周。
          白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL）、肾  2.3 炎症、肾功能及肾损伤相关指标检测
          损伤分子 1（kidney injury molecule-1，KIM-1）、胱抑素 C           各组大鼠末次给药 2 h 后，麻醉，眼眶静脉采血，以
         （cystatin  C，Cys-C）ELISA 试 剂 盒（ 货 号 分 别 为           3 000 r/min离心10 min，取上清液，严格按照ELISA试剂
          CB10659-Ra、CB10155-Ra、CB12464-Ra、CB10651-Ra、       盒说明书操作，检测血清中 TNF-α、IL-1β、IL-6、BUN、
          CB10849-Mu、CB10747-Ra、CB10229-Ra）均购自上海科            β2-MG、Scr、NGAL、KIM-1 和 Cys-C 水平。使用代谢笼
          艾 博 生 物 技 术 有 限 公 司 ；丙 二 醛（malondialdehyde，        收集各组大鼠24 h的尿液标本，离心，取上清液，严格按
          MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）             照ELISA试剂盒说明书操作，检测其中24 h UP水平。


          中国药房  2024年第35卷第2期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 2    · 199 ·
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