Page 76 - 《中国药房》2024年2期
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相应IgG二抗（稀释比例为1∶2 000），室温下孵育2 h；以                    尼组和阳性对照组细胞的增殖活力（0.76±0.08、0.53±
          TBST缓冲液洗膜，加入显影液，使用凝胶成像系统成像                          0.05、0.51±0.03）均显著降低（P＜0.05）；与阳性对照组
          并采用 Image J 软件进行分析，以目的蛋白与内参蛋白                      （0.51±0.03）比较，5、10 μmol/L安罗替尼组细胞的增殖
         （β-actin）的灰度值比值作为目的蛋白的相对表达量。                         活力（0.90±0.04、0.76±0.08）均显著升高（P＜0.05），而
          2.3 安罗替尼对T98G细胞恶性表型影响机制的验证                          20 μmol/L 安罗替尼组细胞的增殖活力（0.53±0.05）则
          2.3.1 细胞增殖活力                                        与阳性对照组相当（P＞0.05）。
                                       5
              取对数生长期细胞，以2×10 个/mL接种至96孔板                      3.1.2 细胞黏附能力
          中，每孔100 μL。将细胞分为对照组、安罗替尼组、抑制                            与对照组（239.67±10.26）比较，5、10、20 μmol/L 安
          剂组和激活剂组，每组设置3个复孔。对照组细胞不进                            罗替尼组和阳性对照组的黏附细胞数（179.67±15.31、
          行干预；安罗替尼组细胞分别用 10 μmol/L 的安罗替尼                      143.67±10.02、96.00±5.29、94.00±4.58）均 显 著 减 少
         （浓度参考“2.2”项下各实验结果设置）进行干预；抑制剂                        （P＜0.05），且有浓度依赖趋势；与阳性对照组比较，5、
          组细胞用 10 μmol/L 的安罗替尼+5 μmol/L 的 NF-κB 通             10 μmol/L 安罗替尼组的黏附细胞数均显著增加（P＜
                              [8]
          路抑制剂 BAY 11-7082 进行干预；激活剂组细胞用 10                    0.05），而20 μmol/L安罗替尼组的黏附细胞数则与阳性
          μmol/L 的安罗替尼+1 μmol/L 的 NF-κB 通路激活剂                 对照组相当（P＞0.05）。结果见图1。
                  [9]
          prostratin 进行干预；同时，设置不加细胞的调零孔作为                     3.1.3 细胞迁移和侵袭能力
          空白组。培养24 h后，按“2.2.1”项下方法检测各组细胞                          与对照组[细胞迁移率为（43.67±2.08）%、侵袭细胞
          的增殖活力。                                              数为 42.67±3.79]比较，5、10、20 μmol/L 安罗替尼组和
          2.3.2 细胞黏附能力                                        阳性对照组的细胞迁移率[（35.33±2.08）%、（26.33±
              取对数生长期细胞，以 2×10 个/mL 接种至 6 孔板                   2.08）%、（19.00±2.00）%、（18.33±1.53）%]和侵袭细胞
                                       5
          中，每孔 50 μL。按“2.3.1”项下方法分组、处理，再按                     数（32.00±2.65、27.67±1.53、15.67±1.53、15.67±2.08）
         “2.2.2”项下方法检测各组黏附细胞数。                                均显著降低（P＜0.05），且有浓度依赖趋势；与阳性对照组
          2.3.3 细胞迁移和侵袭能力                                     比较，5、10 μmol/L安罗替尼组的细胞迁移率和侵袭细胞
              取对数生长期细胞，以2×10 个/mL接种至6孔板中，                     数均显著升高（P＜0.05），而20 μmol/L安罗替尼组的上述
                                      5
          每孔300 μL。按“2.3.1”项下方法分组、处理，再按“2.2.3”                指标则与阳性对照组相当（P＞0.05）。结果见图2、图3。
          项下方法检测各组细胞迁移率和侵袭细胞数。                                3.1.4 细胞EMT相关蛋白的表达情况
          2.3.4 细胞EMT及NF-κB通路相关蛋白表达情况                             与对照组比较，各药物组细胞中 E-cadherin 蛋白的
                                       5
              取对数生长期细胞，以 2×10 个/mL 接种至 6 孔板                   表达均显著上调，N-cadherin、vimentin、FN 蛋白的表达
          中，每孔 300 μL。按“2.3.1”项下方法分组、处理，再按                    均显著下调（P＜0.05），且有浓度依赖趋势；与阳性对照
         “2.2.4”项下方法检测各组细胞中E-cadherin、N-cadherin、             组比较，5、10 μmol/L安罗替尼组细胞中E-cadherin蛋白
          vimentin、FN、NF- κB  p65、p-NF- κB  p65 蛋 白（NF- κB    的表达均显著下调（P＜0.05），N-cadherin、vimentin、FN
          p65、p-NF-κB p65的稀释比例分别为1∶5 000、 1∶2 000）            蛋白的表达均显著上调（P＜0.05）；而20 μmol/L安罗替
          的相对表达量。                                             尼组的上述蛋白表达则与阳性对照组相当（P＞0.05）。
          2.4 统计学方法                                           结果见图4、表1。
              采用SPSS 23.0软件对数据进行统计分析。计量资                      3.2 安罗替尼对T98G细胞恶性表型影响的机制
          料均以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，两                         3.2.1 细胞增殖活力
          两比较采用Tukey检验。检验水准α＝0.05。                                与对照组（1.00±0.08）比较，安罗替尼组细胞的增
          3 结果                                                殖活力（0.76±0.07）显著降低（P＜0.05）；与安罗替尼组
          3.1 安罗替尼对T98G细胞恶性表型的影响                              比较，抑制剂组细胞的增殖活力（0.48±0.02）显著降低
          3.1.1 细胞增殖活力                                       （P＜0.05），而激活剂组细胞的增殖活力（1.01±0.08）则
              与对照组（1.00±0.07）比较，10、20 μmol/L 安罗替              显著升高（P＜0.05）。











                 A.对照组           B. 5 μmol/L安罗替尼组   C. 10 μmol/L安罗替尼组   D. 20 μmol/L安罗替尼组      E.阳性对照组
                                       图1 不同浓度安罗替尼对细胞黏附能力的影响


          · 194 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 2                               中国药房  2024年第35卷第2期
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