Page 45 - 《中国药房》2022年2期

2.1.6 线性关系考察 取“2.1.2”项下线性工作溶液，按 2.1.11 样品含量测定 取盐橘核样品粉末，按“2.1.3”
“2.1.4”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以各待测 项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.4”项下色谱条件进
成分的质量浓度（X，μg/mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵 样测定，记录峰面积并按标准曲线法计算样品含量。
坐标进行线性回归。结果见表1。 2.2 盐橘核颜色参数的测定
表1 柠檬苦素等成分的回归方程与线性范围 2.2.1 测定条件 光源为D65，标准观察角度为 2°，照
待测成分 回归方程 r 线性范围/（μg/mL） 明口径为 50 mm，仪器误差在色差值（ΔE*ab）0.6 以
柠檬苦素 Y＝11 748 544.86X+1 556 167.90 0.999 9 540～1 140 内，重复性标准偏差在ΔE*ab 0.07以内。
诺米林 Y＝13 890 776.00X－17 550.60 0.999 9 50～250 2.2.2 精密度考察 取盐橘核样品（编号S7）粉末，置于
黄柏酮 Y＝50 774 550.51X－38 989.05 0.999 2 10～90
色彩色差计中，按“2.2.1”项下测定条件于同日内连续测
2.1.7 精密度试验 取“2.1.1”项下混合对照品溶液，按
定 6 次。结果显示，L*、a*、b*的 RSD 分别为 0.09％、
“2.1.4”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录峰面积。
0.49％、0.29％（n＝6），表明方法精密度良好。
结果显示，柠檬苦素、诺米林、黄柏酮峰面积的RSD分别
2.2.3 重复性考察 取盐橘核样品（编号S7）粉末，共6
为2.64％、3.47％、2.83％（n＝6），表示仪器精密度良好。
份，置于色彩色差计中，按“2.2.1”项下测定条件测定。
2.1.8 稳定性试验 取“2.1.3”项下供试品溶液（编号 结 果 显 示 ，L*、a*、b* 的 RSD 分 别 为 0.36％ 、1.98％ 、
S6），分别于室温下放置 0、2、4、8、12、18、24 h 时按 1.86％（n＝6），表明方法重复性良好。
“2.1.4”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果显 2.2.4 样品稳定性考察 取盐橘核样品（编号S7）粉末，
示，柠檬苦素、诺米林、黄柏酮峰面积的 RSD 分别为 置于色彩色差计中，按“2.2.1”项下测定条件于同日早上
2.91％、4.13％、3.42％（n＝7），表明供试品溶液于室温下 9：00开始，每隔2 h测定1次，连续测定6次。结果显示，
放置24 h内稳定性良好。 L*、a*、b*的 RSD 分别为 0.45％、1.99％、2.18％（n＝6），
2.1.9 重复性试验 取盐橘核样品（编号 S6）粉末 1 g， 表明样品日内稳定性良好。取盐橘核样品（编号 S7）粉
共 6 份，分别按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按 末，置于色彩色差计中，分别于放置0、1、2、3、4、5 d时同
“2.1.4”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标准曲 一时间点，按“2.2.1”项下测定条件测定。结果显示，L*、
线法计算样品含量。结果显示，柠檬苦素、诺米林、黄柏 a*、b*的RSD分别为0.43％、2.06％、1.80％（n＝6），表明
酮含量的 RSD 分别为 2.82％、3.87％、2.45％（n＝6），表 样品日间稳定性良好。
示方法重复性良好。 2.2.5 样品色泽测定 取盐橘核样品粉末，置于色彩色
2.1.10 加样回收率试验 精密称取已知含量的盐橘核 差计中，按“2.2.1”项下测定条件测定样品粉末的颜色，
2
样品（编号 S6）粉末 1 g，共 6 份，分别精密加入柠檬苦 每样品平行测定3次，取平均数。ΔE*ab＝[（Li*－L0*）+
2
2 1/2
素、诺米林、黄柏酮对照品溶液（配制方法同“2.1.1”项） （ai*－a0*）+（bi*－b0*）] （式中，L0*、a0*、b0*表示 10 批
适量，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.4” 盐橘核饮片的平均值，即标准饮片的色值，Li*、ai*、bi*表
项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收 示工艺优化条件下样品的色值；ΔE*ab 值越小，表示炮
[16]
率。结果见表2。 制工艺越优） 。
2.3 盐橘核抗氧化活性的测定
表2 柠檬苦素等成分的加样回收率试验结果（n＝6）
2.3.1 DPPH工作溶液的配制 称取DPPH粉末0.019 7 g，
待测成分 已知量/mg 加入量/mg 测得量/mg 加样回收率/％ 平均加样回收率/％ RSD/％
柠檬苦素 14.868 2 15.000 0 30.728 2 105.73 105.95 2.04 置于 250 mL 量瓶中，加 75％乙醇溶解并定容，即得
14.739 2 15.000 0 30.571 0 105.55 DPPH工作溶液。
14.304 3 15.000 0 30.715 5 109.41 2.3.2 提取液的制备 精密称取盐橘核样品粉末0.5 g，
13.881 2 15.000 0 29.938 1 107.05
14.721 3 15.000 0 30.477 5 105.04 置于 50 mL 具塞锥形瓶中，加甲醇 20 mL，称定质量，超
14.778 5 15.000 0 30.218 4 102.93 声（功率300 W、频率70 kHz）提取50 min，取出，冷却，再
诺米林 1.378 5 1.600 0 3.110 7 108.26 109.56 1.24 次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，静置，经
1.489 5 1.600 0 3.250 1 110.04
1.480 5 1.600 0 3.213 4 108.31 0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
1.464 0 1.600 0 3.251 8 111.74 2.3.3 DPPH自由基清除率的测定 取“2.3.1”项下DPPH
1.474 5 1.600 0 3.215 5 108.81 工作溶液 140 μL、“2.3.2”项下盐橘核提取液 30 μL，混
1.479 0 1.600 0 3.242 4 110.22
黄柏酮 0.843 5 1.000 0 1.906 8 106.34 106.65 1.75 合于 96 孔板中，振荡 1 min 后再于 30 ℃下避光反应 30
0.882 6 1.000 0 1.980 7 109.81 min，使用酶标仪于 517 nm 波长处测定吸光度（A1 ）。以
0.876 5 1.000 0 1.940 4 106.39 水加等体积的DPPH工作溶液作为空白溶液，同法反应
0.893 6 1.000 0 1.947 5 105.39
0.873 6 1.000 0 1.949 1 107.55 后，于517 nm波长处测定吸光度（A0 ）。取75％乙醇140
0.820 2 1.000 0 1.864 6 104.44 μL，加入“2.3.2”项下盐橘核提取液30 μL，同法反应后，

中国药房 2022年第33卷第2期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 2 ·167 ·