Page 40 - 《中国药房》2022年2期

方法重复性良好。 700
2.1.6 稳定性试验 取“2.1.3”项下供试品溶液（编号 600
S2），分别于室温下放置 0、2、4、8、16、24、36、48 h 时按 500
“2.1.1”项下色谱条件进样测定，以16号峰（黄芩苷）为参 U/mV 400 新绿原酸
绿原酸
照，记录各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果 300 隐绿原酸
异绿原酸B
显示，18 个共有峰相对保留时间的 RSD 为 0.07％～ 200 3，5-O-二咖啡酰奎宁酸
100 4，5-O-二咖啡酰奎宁酸
0.44％（n＝8），相对峰面积的 RSD 为 0.15％～2.91％ 供试品溶液（编号S2）
0 黄芩苷
（n＝8），表明供试品溶液于室温下放置 48 h 内稳定性
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40
良好。 t/min
1：新绿原酸；5：绿原酸；7：隐绿原酸；13：异绿原酸 B；14：3，5-
2.1.7 指纹图谱的建立 取 10 批银黄吸入溶液，按
二-O-咖啡酰奎宁酸；15：4，5-二-O-咖啡酰奎宁酸；16：黄芩苷
“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱
图 2 新绿原酸等成分对照品溶液及供试品溶液的
条件进样测定，记录色谱图。采用《中药色谱指纹图谱
HPLC图
相似度评价系统（2012 版）》对 10 批银黄吸入溶液的色
表1 10批银黄吸入溶液的相似度评价结果
谱图进行分析，以S1为参照图谱，采用中位数法自动匹
编号 相似度 编号 相似度
配，得到10批银黄吸入溶液的叠加指纹图谱和对照指纹 S1 0.997 S6 0.989
图谱（R），详见图 1。由图 1 可见，10 批银黄吸入溶液中 S2 0.996 S7 0.980
共有18个共有峰。 S3 0.996 S8 0.995
S4 0.992 S9 0.995
16
S5 0.991 S10 0.994
1 400
1 300 为流动相进行梯度洗脱（0～14 min，8％A→15％A；14～
1 200 5
1 100 1 2 3 4 6 7 8 9 10 11 17 18 20 min，15％A→16％A；20～22 min，16％A→26％A；
14
1 000 12 13 15 S10
900 S9 22～30 min，26％A→28％A；30～40 min，28％A→60％A）；
800 S8 检测波长为 327 nm；柱温为 30 ℃；流速为 1.0 mL/min；
U/mV 700 S7
600 S6 进样量为10 μL。
500 S5
400 S4 2.2.2 混合对照品溶液的制备 精密称取新绿原酸、绿
300 S3 原酸、隐绿原酸对照品适量，加 50％甲醇溶解并稀释，
200 S2
100 S1 摇匀，制成上述成分质量浓度分别为24.95、39.29、31.58
0 R
μg/mL 的混合对照品溶液。
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40
t/min 2.2.3 供试品溶液的制备 同“2.1.3”项。
图1 10批银黄吸入溶液的HPLC叠加指纹图谱和对照
2.2.4 空白对照溶液及阴性样品溶液的制备 取 50％
指纹图谱
甲醇，经 0.22 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得空白对
2.1.8 共有峰的指认 通过与“2.1.2”项下各对照品溶 照溶液。取黄芩提取物适量，置于 10 mL 棕色量瓶中，
液（按“2.1.1”项下色谱条件进样测定所得）及供试品溶 加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，经0.22 μm微孔滤
液（编号 S2）的色谱图（图 2）进行比对，共指认了 7 个共 膜滤过，取续滤液，即得缺金银花药材的阴性样品溶液。
有峰，分别为新绿原酸（1号峰）、绿原酸（5号峰）、隐绿原 2.2.5 系统适用性试验 取上述混合对照品溶液、供试
酸（7号峰）、异绿原酸B（13号峰）、3，5-二-O-咖啡酰奎宁 品溶液（编号 S2）、空白对照溶液及阴性样品溶液，按
酸（14 号峰）、4，5-二-O-咖啡酰奎宁酸（15 号峰）和黄芩 “2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图 3。
苷（16号峰）。因黄芩苷色谱峰的响应值较大、分离度较 由图3可见，空白对照溶液及阴性样品溶液未干扰测定，
好，故以黄芩苷峰为参照峰。 各待测成分色谱峰与相邻色谱峰的分离度均大于 1.5，
2.1.9 相似度评价 采用《中药色谱指纹图谱相似度评 理论板数均不低于10 000。
价系统（2012 版）》对 10 批银黄吸入溶液进行相似度评 2.2.6 线性关系考察 取“2.2.2”项下混合对照品溶液
价。结果显示，10批样品与对照指纹图谱的相似度均大 为线性工作溶液Ⅰ。取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸质
于 0.90（黄芩苷峰面积超过总峰面积的 60％，未参与相 量浓度分别为 83.16、78.58、78.94 μg/mL 的混合对照品
似度计算），表明10批银黄吸入溶液的化学成分种类相 溶液（取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸对照品，按“2.2.2”
近，制备工艺较为稳定。结果见表1。 项下方法制备）为线性工作溶液Ⅱ。精密吸取线性工作
2.2 3种成分的含量测定 溶液Ⅰ1、2、5、10 μL，线性工作溶液Ⅱ6、10、12、15 μL，按
2.2.1 色谱条件 以 Welch Ultimate XB-C18 （250 mm× “2.2.1”项下色谱条件进样测定，以进样量（x，μg）为横坐
®
4.6 mm，5 µm）为色谱柱，以乙腈（A）-0.4％磷酸溶液（B） 标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归。结果见表2。

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