Page 41 - 《中国药房》2022年2期
P. 41

900                     900                         表3 新绿原酸等成分的加样回收率试验结果(n=6)
         800                     800
         700                     700
         600                     600                        待测成分 已知量/mg  加入量/mg  测得量/mg 加样回收率/% 平均加样回收率/% RSD/%
         mAU  500                mAU  500                   新绿原酸   0.168 2  0.166 3  0.326 9  95.43  93.92  1.32
                                 400
         400
         300                     300
         200                     200                               0.168 2  0.166 3  0.323 5  93.39
         100                     100
          0                       0                                0.168 2  0.166 3  0.321 6  92.24
           0  5  10  15 20 25  30 35 40  0  5  10  15 20 25  30 35 40  0.168 2  0.166 3  0.323 0  93.08
                    t/min                   t/min                  0.168 2  0.166 3  0.324 9  94.23
                A.空白对照溶液             B.缺金银花的阴性样品溶液
                                                                   0.168 2  0.166 3  0.326 4  95.13
         200                     900                        绿原酸    0.160 5  0.157 2  0.311 4  95.99  94.46  1.45
                                 800
         160                     700                               0.160 5  0.157 2  0.308 1  93.89
                  5              600
         120
         mAU    1  7             mAU  500                          0.160 5  0.157 2  0.306 0  92.56
                                 400
          80
                                 300                               0.160 5  0.157 2  0.307 4  93.45
          40                     200    1
                                 100      5 7                      0.160 5  0.157 2  0.310 0  95.10
          0                       0                                0.160 5  0.157 2  0.311 0  95.74
           0  5  10  15 20 25  30 35 40  0  5  10  15 20 25  30 35 40
                    t/min                   t/min           隐绿原酸   0.174 8  0.157 9  0.325 6  95.50  93.93  1.57
                C.混合对照品溶液             D.供试品溶液(编号S2)                0.174 8  0.157 9  0.322 1  93.29
                                                                   0.174 8  0.157 9  0.320 0  91.96
           1:新绿原酸;5:绿原酸;7:隐绿原酸
                                                                   0.174 8  0.157 9  0.321 3  92.78
        图3   空白对照、阴性样品、混合对照品和供试品溶液的
                                                                   0.174 8  0.157 9  0.324 3  94.68
             HPLC图                                                 0.174 8  0.157 9  0.325 4  95.38
            表2 新绿原酸等成分的回归方程与线性范围                           2.3 QAMS法
         待测成分         回归方程            r       线性范围/μg      2.3.1  校正因子的计算         取银黄吸入溶液,按“2.2.3”项
         新绿原酸     y=2 760.265 6x+9.847 3  0.999 7  0.025 0~1.247 4  下方法制备供试品溶液,再按“2.2.1”项下色谱条件进样
         绿原酸      y=2 946.943 2x-0.460 0  0.999 9  0.039 3~1.178 7  测定3次,记录峰面积。以绿原酸为参照物(绿原酸对照
         隐绿原酸     y=2 389.578 8x+0.429 9  0.999 9  0.031 6~1.184 1
                                                           品价格较为低廉,且易获得),采用斜率校正法计算新绿
        2.2.7  精密度试验      精密吸取“2.2.2”项下混合对照品
                                                           原酸、隐绿原酸的相对校正因子(fs/i ):fs/i=ks/ki (式中,ki为
        溶液,按“2.2.1”项下色谱条件连续进样测定6次,记录峰
                                                                                       [11]
                                                           待测成分斜率,ks为参照物斜率 )。结果显示,新绿原
        面积。结果显示,新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸峰面积的
                                                           酸、隐绿原酸的fs/i分别为1.068、1.233。
        RSD 分别为 0.11%、0.09%、0.11%(n=6),表明仪器精
                                                           2.3.2  耐用性考察       取银黄吸入溶液,按“2.2.3”项下方
        密度良好。
                                                           法制备供试品溶液,再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定
        2.2.8  重复性试验       取银黄吸入溶液(编号 S2),共 6
                                                           3次,记录峰面积,分别考察不同型号HPLC仪和色谱柱
        份,分别按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液,再按
                                                           对新绿原酸等成分fs/i及相对保留时间的影响,结果见表
       “2.2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积并按外标法
                                                           4。由表 4 可见,在不同型号 HPLC 仪和色谱柱下,新绿
        计算样品含量。结果显示,新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸
                                                           原酸、隐绿原酸fs/i及相对保留时间的RSD均小于1.0%,
        含量的 RSD 分别为 0.50%、0.49%、0.47%(n=6),表明
                                                           表明不同型号HPLC仪和色谱柱对新绿原酸等成分fs/i和
        方法重复性良好。                                           相对保留时间的影响较小,方法耐用性良好 。
                                                                                                [10]
        2.2.9  稳定性试验       取“2.2.3”项下供试品溶液(编号              表 4   不同型号 HPLC 仪和色谱柱的耐用性考察结果
        S2),分别于室温下放置 0、2、4、8、16、24、36、48 h 时按                   (n=3)
       “2.2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积。结果显                                                        新绿原酸      隐绿原酸
                                                            指标    型号
        示,新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸峰面积的 RSD 分别为                                                     fs/i 相对保留时间  fs/i 相对保留时间
        0.12%、0.08%、0.13%(n=8),表明供试品溶液于室温下                  液相系统 Agilent HPLC仪          1.068  0.684  1.233  1.082
                                                                  Shimadzu HPLC仪        1.060  0.682  1.233  1.081
        放置48 h内稳定性良好。                                       RSD,%                       0.54  0.21  0.  0.07
        2.2.10  加样回收率试验        取已知含量的银黄吸入溶液                 色谱柱   Welch Ultimate XB-C18 (序列号60200303472) 1.068  0.684  1.233  1.082
                                                                        ®
                                                                  Welch Ultimate XB-C18 (序列号60200802712) 1.071  0.682  1.234  1.083
                                                                        ®
       (编号 S2),每份 0.5 mL,共 6 份,置于 10 mL 量瓶中,精
                                                                  Welch Ultimate XB-C18 (序列号60190901911) 1.056  0.673  1.234  1.081
                                                                        ®
        密加入混合对照品溶液(取各对照品,按“2.2.2”项下方                        RSD,%                       0.75  0.87  0.05  0.10
        法制备,得各成分质量浓度均为40 μg/mL的混合对照品                       2.4 外标法与QAMS法的含量测定结果
        溶液)4 mL,按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液,再按                         取10批银黄吸入溶液,按“2.2.3”项下方法制备供试
       “2.2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积并计算加样                        品溶液,以绿原酸为参照物,通过 fs/i分别计算各样品中
        回收率。结果显示,新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸的平均                          新绿原酸、隐绿原酸的含量:Ci=Cs×Ai×fs/i/As (式中,Ai为
        加样回收率分别为93.92%、94.46%、93.93%,RSD均小                 待测成分峰面积,As为参照物峰面积,Ci为待测成分浓
        于2.0%(n=6),表明方法准确度良好。结果见表3。                        度,Cs为参照物浓度);同时,采用外标法测定 10 批银黄


        中国药房    2022年第33卷第2期                                               China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 2  ·163 ·
   36   37   38   39   40   41   42   43   44   45   46