Page 41 - 《中国药房》2022年2期

900 900 表3 新绿原酸等成分的加样回收率试验结果（n＝6）
800 800
700 700
600 600 待测成分 已知量/mg 加入量/mg 测得量/mg 加样回收率/％ 平均加样回收率/％ RSD/％
mAU 500 mAU 500 新绿原酸 0.168 2 0.166 3 0.326 9 95.43 93.92 1.32
400
400
300 300
200 200 0.168 2 0.166 3 0.323 5 93.39
100 100
0 0 0.168 2 0.166 3 0.321 6 92.24
0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 5 10 15 20 25 30 35 40 0.168 2 0.166 3 0.323 0 93.08
t/min t/min 0.168 2 0.166 3 0.324 9 94.23
A.空白对照溶液 B.缺金银花的阴性样品溶液
0.168 2 0.166 3 0.326 4 95.13
200 900 绿原酸 0.160 5 0.157 2 0.311 4 95.99 94.46 1.45
800
160 700 0.160 5 0.157 2 0.308 1 93.89
5 600
120
mAU 1 7 mAU 500 0.160 5 0.157 2 0.306 0 92.56
400
80
300 0.160 5 0.157 2 0.307 4 93.45
40 200 1
100 5 7 0.160 5 0.157 2 0.310 0 95.10
0 0 0.160 5 0.157 2 0.311 0 95.74
0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 5 10 15 20 25 30 35 40
t/min t/min 隐绿原酸 0.174 8 0.157 9 0.325 6 95.50 93.93 1.57
C.混合对照品溶液 D.供试品溶液（编号S2） 0.174 8 0.157 9 0.322 1 93.29
0.174 8 0.157 9 0.320 0 91.96
1：新绿原酸；5：绿原酸；7：隐绿原酸
0.174 8 0.157 9 0.321 3 92.78
图3 空白对照、阴性样品、混合对照品和供试品溶液的
0.174 8 0.157 9 0.324 3 94.68
HPLC图 0.174 8 0.157 9 0.325 4 95.38
表2 新绿原酸等成分的回归方程与线性范围 2.3 QAMS法
待测成分 回归方程 r 线性范围/μg 2.3.1 校正因子的计算 取银黄吸入溶液，按“2.2.3”项
新绿原酸 y＝2 760.265 6x+9.847 3 0.999 7 0.025 0～1.247 4 下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样
绿原酸 y＝2 946.943 2x－0.460 0 0.999 9 0.039 3～1.178 7 测定3次，记录峰面积。以绿原酸为参照物（绿原酸对照
隐绿原酸 y＝2 389.578 8x+0.429 9 0.999 9 0.031 6～1.184 1
品价格较为低廉，且易获得），采用斜率校正法计算新绿
2.2.7 精密度试验 精密吸取“2.2.2”项下混合对照品
原酸、隐绿原酸的相对校正因子（fs/i ）：fs/i＝ks/ki （式中，ki为
溶液，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰
[11]
待测成分斜率，ks为参照物斜率 ）。结果显示，新绿原
面积。结果显示，新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸峰面积的
酸、隐绿原酸的fs/i分别为1.068、1.233。
RSD 分别为 0.11％、0.09％、0.11％（n＝6），表明仪器精
2.3.2 耐用性考察 取银黄吸入溶液，按“2.2.3”项下方
密度良好。
法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定
2.2.8 重复性试验 取银黄吸入溶液（编号 S2），共 6
3次，记录峰面积，分别考察不同型号HPLC仪和色谱柱
份，分别按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按
对新绿原酸等成分fs/i及相对保留时间的影响，结果见表
“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按外标法
4。由表 4 可见，在不同型号 HPLC 仪和色谱柱下，新绿
计算样品含量。结果显示，新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸
原酸、隐绿原酸fs/i及相对保留时间的RSD均小于1.0％，
含量的 RSD 分别为 0.50％、0.49％、0.47％（n＝6），表明
表明不同型号HPLC仪和色谱柱对新绿原酸等成分fs/i和
方法重复性良好。 相对保留时间的影响较小，方法耐用性良好 。
[10]
2.2.9 稳定性试验 取“2.2.3”项下供试品溶液（编号 表 4 不同型号 HPLC 仪和色谱柱的耐用性考察结果
S2），分别于室温下放置 0、2、4、8、16、24、36、48 h 时按 （n＝3）
“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果显 新绿原酸 隐绿原酸
指标 型号
示，新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸峰面积的 RSD 分别为 fs/i 相对保留时间 fs/i 相对保留时间
0.12％、0.08％、0.13％（n＝8），表明供试品溶液于室温下 液相系统 Agilent HPLC仪 1.068 0.684 1.233 1.082
Shimadzu HPLC仪 1.060 0.682 1.233 1.081
放置48 h内稳定性良好。 RSD，％ 0.54 0.21 0. 0.07
2.2.10 加样回收率试验 取已知含量的银黄吸入溶液 色谱柱 Welch Ultimate XB-C18 （序列号60200303472） 1.068 0.684 1.233 1.082
®
Welch Ultimate XB-C18 （序列号60200802712） 1.071 0.682 1.234 1.083
®
（编号 S2），每份 0.5 mL，共 6 份，置于 10 mL 量瓶中，精
Welch Ultimate XB-C18 （序列号60190901911） 1.056 0.673 1.234 1.081
®
密加入混合对照品溶液（取各对照品，按“2.2.2”项下方 RSD，％ 0.75 0.87 0.05 0.10
法制备，得各成分质量浓度均为40 μg/mL的混合对照品 2.4 外标法与QAMS法的含量测定结果
溶液）4 mL，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按 取10批银黄吸入溶液，按“2.2.3”项下方法制备供试
“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样 品溶液，以绿原酸为参照物，通过 fs/i分别计算各样品中
回收率。结果显示，新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸的平均 新绿原酸、隐绿原酸的含量：Ci＝Cs×Ai×fs/i/As （式中，Ai为
加样回收率分别为93.92％、94.46％、93.93％，RSD均小 待测成分峰面积，As为参照物峰面积，Ci为待测成分浓
于2.0％（n＝6），表明方法准确度良好。结果见表3。 度，Cs为参照物浓度）；同时，采用外标法测定 10 批银黄

中国药房 2022年第33卷第2期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 2 ·163 ·