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成每1 mL含马来酰肼150 ng的限度对照品溶液。 2.4 线性关系考察
2.2.3 含限度浓度杂质的供试品溶液 取阿嗪米特原 分别取“2.2.1”项下对照品溶液 65、150、250、500、
料药约500 mg，精密称定，置于10 mL量瓶中，加溶剂适 750、1 000 μL，置于不同10 mL量瓶中，加溶剂稀释至刻
量，然后加入“2.2.1”项下对照品溶液 500 μL，超声处理 度，制成马来酰肼质量浓度分别为 19.5、45、75、150、
30 min 使溶解，然后加溶剂稀释至刻度，摇匀，制成每 1 225、300 ng/mL 的系列标准溶液。取上述系列标准溶
mL 含马来酰肼 150 ng 的含限度浓度杂质的供试品 液，分别按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。
溶液。 以峰面积（y）为纵坐标、待测物质量浓度（x，ng/mL）为横
2.2.4 供试品溶液 取阿嗪米特原料药约500 mg，精密 坐标，采用最小二乘法进行线性回归。结果显示，马来
称定，置于10 mL量瓶中，加溶剂适量，超声处理30 min 酰肼的线性方程为 y＝34.709x+10.472（r＝0.999 9），该
使溶解，然后加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。 成分检测质量浓度的线性范围为19.5～300 ng/mL（相当
2.3 专属性试验 于限度的13％～200％）。
取空白溶液（溶剂）以及“2.2”项下限度对照品溶液、 2.5 检测限和定量限考察
供试品溶液和含限度浓度杂质的供试品溶液各 20 μL， 取“2.2.2”项下限度对照品溶液适量，用溶剂逐级稀
分别按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果 释，然后分别按“2.1”项下色谱条件平行测定6次。将测
显示，马来酰肼的保留时间在4.5 min左右，其色谱峰峰形
得的信号与空白处的信号（基线噪音）进行比较，分别以
良好，基线平稳；理论板数以马来酰肼计大于6 000，马来
信噪比 3 ∶ 1、10 ∶ 1 计算检测限和定量限。结果，马来酰
酰肼色谱峰与相邻色谱峰间的分离度大于1.5，且空白溶
肼的检测限为4.5 ng/mL、定量限为19.5 ng/mL，6次平行
液不干扰测定。专属性试验的HPLC图见图2。
测定的定量限的 RSD 为 4.03％（n＝6），表明该方法灵
1.5 敏、稳定。
1.0 2.6 精密度试验
mV
U， 0.5 2.6.1 仪器精密度 取“2.2.3”项下含限度浓度杂质的
0 供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定 6 次，
0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 记录峰面积。结果显示，杂质保留时间和峰面积的RSD
t，min
A.空白溶液 分别为0.05％、0.74％（n＝6），表明仪器精密度良好。
1.5
2.6.2 重复性 取阿嗪米特原料药（批号190011）适量，
1.0 按“2.2.3”项下方法制备含限度浓度杂质的供试品溶液，
mV
U， 0.5 平行制备6份。分别按“2.1”项下色谱条件进样测定，记
0 录峰面积并按外标法计算杂质的含量。结果显示，杂质
0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 含量的RSD为2.69％（n＝6），表明方法的重复性良好。
t，min
B.供试品溶液 2.6.3 中间精密度 分别由2名实验人员于不同时间点
1.5
按“2.2.3”项下方法制备含限度浓度杂质的供试品溶液
mV 1.0 （批号190011），各平行制备6份。分别按“2.1”项下色谱
U， 0.5
条件进样测定，记录峰面积并按外标法计算杂质含量。
0
结果显示，2 名实验人员测得杂质含量的 RSD 为 5.63％
0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5
t，min （n＝12），表明方法的中间精密度良好。
C.限度对照品溶液
2.7 准确度试验
1.5
取阿嗪米特原料药（批号 190011）约 500 mg，共 9
1.0
mV 份，精密称定，分别置于 10 mL 量瓶中，加溶剂适量，然
U， 0.5
后分别加入“2.2.1”项下对照品溶液250、500、750 μL，各
0
3份，超声处理30 min使溶解，加溶剂稀释至刻度，摇匀，
0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5
t，min 分别作为质量浓度相当于杂质限度50％、100％和150％
D.含限度浓度杂质的供试品溶液
的供试品溶液。取上述溶液，分别按“2.1”项下色谱条件
注：1.马来酰肼
Note：1. maleic hydrazide 进样测定，记录峰面积，按外标法计算马来酰肼的含量
图2 专属性试验的HPLC图 并计算其加样回收率。结果显示，各质量浓度供试品溶
Fig 2 HPLC chromatograms of specificity tests 液中马来酰肼的加样回收率在 98.79％～103.76％范围

中国药房 2021年第32卷第18期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 18 ·2191 ·