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内，RSD 均小于 3.00％（n＝3），表明方法的准确度良 表3 阿嗪米特中马来酰肼含量的测定结果
好。准确度试验结果见表1。 Tab 3 Results of content determination of maleic
表1 准确度试验结果（n＝3） hydrazide in azintamide
Tab 1 Results of accuracy tests（n＝3） 批号 马来酰肼含量，ng/mL
190011 ND
称样量，mg 样品中含量，ng 加入量，ng 测得量，ng 加样回收率，％ 平均加样回收率，％ RSD，％
499.97 ND 757.50 755.11 99.68 100.78 2.26 190012 ND
190013 ND
500.88 ND 757.50 751.86 99.26
500.83 ND 757.50 783.20 103.39 注：“ND”表示未检出[低于检测限（4.5 ng/mL）]
499.71 ND 1 515.00 1 557.23 102.79 103.01 0.65 Note：“ND”means undetected [below the limit of detection（4.5
500.03 ND 1 515.00 1 552.50 102.48 ng/mL）]
500.33 ND 1 515.00 1 572.01 103.76
500.47 ND 2 272.50 2 262.37 99.55 99.30 0.45 3 讨论
500.03 ND 2 272.50 2 262.67 99.57 3.1 限度的确定
500.10 ND 2 272.50 2 244.93 98.79
马来酰肼作为 3 类致癌物质，尚无充足证据证实其
注：“ND”表示未检出[低于检测限（4.5 ng/mL）]
致癌性，但其对非目标生物的慢性毒性仍存在不确定
Note：“ND”means undetected [below the limit of detection（4.5
性 。由于马来酰肼具有潜在的基因毒性，故本研究按
[15]
ng/mL）]
2.8 稳定性试验 基因毒性杂质分类中的 2 类物质使用毒理学关注阈值
[8]
取“2.2.2”项下限度对照品溶液和“2.2.3”项下含限 （TTC）对其进行限度控制 ，以确保药品的安全性 [16－17] 。
度浓度杂质的供试品溶液，分别于室温下放置0、1、2、3、 根据TTC计算可接受摄入量发现，一个具有诱变性的杂
4、5、6、7、8、9、10、11、12、24 h时按“2.1”项下色谱条件进 质每天每人摄入 1.5 μg 时其风险被认为是可以忽略的
样测定，记录峰面积。结果显示，限度对照品溶液和含 （终生暴露情况下，理论的患癌风险小于十万分之
[18]
限度浓度杂质的供试品溶液中马来酰肼峰面积的 RSD 一） 。基因毒性杂质可接受限度（ppm）＝TTC 限度
[6]
分别为1.55％和1.62％（n＝14），表明上述溶液在室温下 （μg/d）/药物的最大日剂量（g/d） 。根据阿嗪米特说明
放置24 h稳定。 书中每天最大剂量450 mg，可计算出马来酰肼的可接受
2.9 耐用性试验 限度（ppm）＝1.5（μg/d）/0.45（g/d）＝3.33 ppm。因此，笔
按“2.2.3”项下方法制备含限度浓度杂质的供试品 者将马来酰肼的限度定为3 ppm。本研究所建立方法的
溶液（批号 190011），在其他色谱条件不变的情况下，采 检测限可达0.09 ppm（4.5 ng/mL），远低于上述限度。通
用外标法分别考察流动相A不同浓度（0.196 7、0.200 0、 过本研究建立的方法对3批阿嗪米特原料药进行测定，
0.203 3 mol/L）、不同流速（0.9、1.0、1.1 mL/min）、不同柱 结果均未检出马来酰肼，表明3批原料中马来酰肼的含
温（25、30、35 ℃）、不同检测波长[激发波长、发射波长 量均低于检测限，满足限度控制的要求。
（313 nm、387 nm；315 nm、389 nm；317 nm、391 nm）]对 3.2 检测方法的选择
含量测定结果的影响，并计算其回收率，每个条件平行 笔者前期试验发现，采用HPLC-紫外法进行测定的
测定2次，取平均值。结果显示，各种条件下马来酰肼回 灵敏度不能满足检测要求。因本品含有共轭结构，具有
收率的RSD均小于2.00％（n＝6），表明方法的耐用性良 荧光响应，考虑FLD的专属性和灵敏度均优于紫外检测
好。耐用性试验结果见表2。 器，所以笔者最终采用了HPLC-FLD法进行检测。马来
表2 耐用性试验结果（n＝6） 酰肼是弱酸，在不同pH条件下其电离平衡会发生改变，
[19]
Tab 2 Results of durability tests（n＝6） 荧光强度也会因其离解状态不同而发生改变 。笔者
项目 平均回收率，％ 回收率RSD，％ 在预试验中发现，当流动相为0.1 mol/L乙酸溶液和甲醇
流动相A不同浓度 102.12 0.86 时，马来酰肼的响应信号较弱，无法满足测定需要；当降
不同流速 101.00 1.39
不同柱温 102.45 1.61 低流动相pH后，马来酰肼的响应信号明显增强，故本研
不同检测波长 102.04 1.28 究最终确定流动相为0.2 mol/L乙酸溶液和甲醇。此外，
2.10 样品中杂质含量测定 笔者还通过固定激发波长对马来酰肼对照品溶液进行
取 3 批阿嗪米特原料药，分别按“2.2.4”项下方法制 发射波长扫描以及固定发射波长进行激发波长扫描，反
备供试品溶液，然后按“2.1”项下色谱条件进样测定，记 复调整优化后确定激发波长为 315 nm、发射波长为 389
录峰面积并按外标法计算马来酰肼含量。结果显示，3 nm。本研究建立的 HPLC-FLD 法与 Kubilius 等 建立
[14]
批阿嗪米特原料药中均未检出马来酰肼。阿嗪米特中 的方法（检测限 25 ng/mL）相比，检测限更低（可达 4.5
马来酰肼含量测定结果见表3。 ng/mL）、峰形更理想。

·2192 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 18 中国药房 2021年第32卷第18期