Page 20 - 2021年18期

ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of potential genotoxic impurity maleic hydrazide
in azintamide raw material. METHODS：HPLC-FLD method was adopted. The determination was performed on Thermo Syncronis
C18 column with mobile phase consisted of 0.2 mol/L acetic acid-methanol（gradient elution）. The column temperature was set at
30 ℃，the excitation wavelength was 315 nm and emission wavelength was 389 nm. The flow rate was 1 mL/min，and the sample
size was 20 μL. RESULTS：The blank solvent and azintamide did not interfere with the determination of maleic hydrazide. The
linear range of maleic hydrazide was 19.5-300 ng/mL （r＝0.999 9）. The limit of detection was 4.5 ng/mL and the limit of
quantification was 19.5 ng/mL. The recovery ranged from 98.79％ to 103.76％（RSDs were lower than 3.00％，n＝9）. RSDs of
precision and stability（24 h）tests were no more than 5.63％，and those of durability tests were less than 2.00％（n＝6）. Maleic
hydrazide was not detected in 3 batches of azinamide raw material. CONCLUSIONS：The method is specific，sensitive and
accurate. It can be used for the trace determination of maleic hydrazide in azintamide or other matrix.
KEYWORDS Maleic hydrazide；Azintamide；HPLC-FLD；Genotoxic impurity

马来酰肼（maleic hydrazide）的化学名为顺丁烯二 1.2 主要药品与试剂
酰肼，是一种合成哒嗪类化合物的常用原料。哒嗪类化 马来酰肼和阿嗪米特的结构式见图1。
合物作为重要的中间体，被广泛应用于农药及头孢唑
兰、普纳替尼等药品的合成中 [1－4] 。尽管目前尚无证据
证明马来酰肼具有基因毒性和致癌性，但其结构中存在
警示结构——肼，故该成分为潜在的基因毒性杂质 。
[5]
潜在基因毒性杂质的毒性虽然未经实验证实或模型验 A.马来酰肼 B.阿嗪米特
证，但人用药品注册技术要求国际协调会、美国 FDA 及 图1 马来酰肼和阿嗪米特的结构式
欧洲药品管理局等均对其在药品中的限度提出了具体 Fig 1 Structures of maleic hydrazide and azintamide
要求 [6－8] 。 马来酰肼对照品（美国 AccuStandard 公司，批号
阿嗪米特（azintamide）的化学名为 2-（6-氯哒嗪-3- 02317JT，纯度 100％）；阿嗪米特原料药（由扬州一洋制
[9]
基）硫烷基-N，N-二乙基乙酰胺，于 1959 年首次合成 ，
药有限公司提供，由韩国东邦化学株式会社生产，批号
是一种促进胆汁分泌的药物，可用于治疗因胆汁分泌不
分别为190011、190012、190013，纯度均不低于99％）；乙
足而引起的消化系统方面的疾病 [10－11] 。目前，阿嗪米特
酸（南京化学试剂股份有限公司）为分析纯，甲醇（美国
已成为临床上主要使用的消化酶类药物之一 ，而马来
[11]
Tedia公司）为色谱纯，水为超纯水。
酰肼为其合成的起始物料 。因此有必要建立灵敏度 2 方法与结果
[12]
高、专属性强、基质干扰小、重复性好的痕量定量分析方
2.1 色谱条件
法来对马来酰肼在阿嗪米特原料药中的残留量进行考
以 Thermo Syncronis C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）为
察。由于马来酰肼沸点高、不易气化，常用的检测方法
色谱柱，以0.2 mol/L乙酸溶液（A）-甲醇（B）为流动相进
有高效液相色谱（HPLC）-紫外法（检测限 135 ng/mL）、
行梯度洗脱（0～3 min，90％A；3～4 min，90％A→10％A；
液质联用法（检测限 0.5 ng/mL）等 [13－15] 。其中，液质联
4～12 min，10％A；12～13 min，10％A→90％A；13～18
[15]
用技术的检测限虽然可达 0.5 ng/mL ，但易受大型仪
min，90％A）；柱温为 30 ℃；激发波长为 315 nm，发射波
器设备成本高和普及性低的限制。鉴于此，本研究利用
长为389 nm；流速为1 mL/min；进样量为20 μL。
马来酰肼的荧光特性，采用选择性好、灵敏度高的高效
2.2 溶液的制备
液相色谱-荧光检测器法（HPLC-FLD）对阿嗪米特原料
药中潜在基因毒性杂质马来酰肼进行定量分析，以期为 2.2.1 对照品溶液 取马来酰肼对照品约 20 mg，精密
其质量控制提供参考。 称定，置于20 mL量瓶中，加溶剂[0.2 mol/L乙酸溶液-甲
1 材料 醇（1 ∶ 1，V/V），下同]适量，超声（频率 40 kHz，功率 250
1.1 主要仪器 W，下同）处理 30 min 使溶解，然后加溶剂稀释至刻度，
RF-6000 型荧光分光光度计、LC-20AD 型 HPLC 仪 摇匀，制成质量浓度为1 mg/mL的对照品贮备液。取上
（包括RF-20A型FLD、LabSolutions 6.81网络版工作站） 述对照品贮备液30 μL，置于10 mL量瓶中，加溶剂稀释
均购自日本Shimadzu公司；BT25S型电子天平购自德国 至刻度，摇匀，制成每 1 mL 含马来酰肼 3 μg 的对照品
Sartorius 公 司 ；Synergy UV 型 超 纯 水 系 统 购 自 德 国 溶液。
Merck 公司；KH-250DB 型数控超声波清洗器购自昆山 2.2.2 限度对照品溶液 取“2.2.1”项下对照品溶液
禾创超声仪器有限公司。 500 μL，置于10 mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，制

·2190 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 18 中国药房 2021年第32卷第18期