Page 96 - 《中国药房》2021年10期

定 ，而其他各国药典均未有此类有关物质的控制项。 2.2 溶液的配制
[2]
此外，葡萄糖在发生脱水缩合过程中还有可能生成麦芽 2.2.1 葡萄糖对照品贮备液 精密称取葡萄糖对照品
四糖和麦芽五糖，而麦芽四糖和麦芽五糖会降低葡萄糖 适量，置于 10 mL 量瓶中，用流动相溶解并定容，摇匀，
的纯度，从而影响葡萄糖的质量，且在各国药典中也均 即得质量浓度为100 mg/mL的葡萄糖对照品贮备液。
未见相关检测要求。 2.2.2 有关物质对照品贮备液 精密称取果糖、麦芽
由于糖类化合物分子结构中缺少紫外吸收基团，不 糖、异麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖对照品各
具有紫外吸收的特征，因此不能采用紫外检测器进行检 适量，分别置于100 mL量瓶中，用流动相溶解并定容，
测。检测糖类化合物时，通常会选择蒸发光散射检测器 摇匀，制得质量浓度分别为 0.598 8、0.989 6、0.991 9、
（ELSD）或者示差折光检测器，而示差折光检测器受试 0.597 4、0.403 2、0.588 9 mg/mL的各有关物质单一对照
[7]
验环境影响较大，且存在稳定性差、灵敏度低的缺点 。 品贮备液。
9.0 版《欧洲药典》以钙型强阳离子交换柱为色谱柱，水 2.2.3 供试品溶液 精密称取葡萄糖原料药0.5 g，置于
为流动相，采用示差折光检测器对果糖、麦芽糖、异麦芽 50 mL量瓶中，用流动相溶解并定容，摇匀，即得质量浓
[3]
糖和麦芽三糖进行检测 。本课题组前期研究发现，在 度约为10 mg/mL的供试品溶液。
上述色谱条件下，麦芽糖和异麦芽糖的相对保留时间均 2.2.4 系统适用性试验溶液 精密量取“2.2.2”项下各
为0.8，不能有效分离。基于此，本研究采用酰胺基色谱 有关物质单一对照品贮备液1 mL，置于同一20 mL量瓶
柱，以高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD） 中，精密加入“2.2.1”项下葡萄糖对照品贮备液 2 mL，用
同时测定葡萄糖原料药中果糖、麦芽糖、异麦芽糖、麦芽 流动相稀释至刻度，摇匀，即得系统适用性试验溶液。
三糖、麦芽四糖、麦芽五糖等6种糖类有关物质，旨在为
2.3 系统适用性试验
葡萄糖原料药的质量控制提供参考。
取“2.2”项下系统适用性试验溶液、供试品溶液、空
1 材料
白对照溶液（流动相）适量，按“2.1”项下色谱条件进样测
1.1 主要仪器
定，记录色谱图。结果，各有关物质色谱峰之间以及与
本研究所用主要仪器有 ELSD6000 1290 型 HPLC
主峰之间的分离度均大于 1.5（麦芽糖与异麦芽糖色谱
仪及配套的在线真空脱气装置、四元梯度泵、自动进样
峰之间的分离度大于1.5），理论板数以葡萄糖计均大于
器、柱温箱以及ELSD（美国Alltech公司），Mettler XP205
5 000，且空白对照溶液色谱图中未检测到色谱峰，表明
型十万分之一电子天平（瑞士 Mettler Toledo 公司），
其对所有待测成分无干扰，详见图1。
GZX 9030MBE 型电热恒温鼓风干燥箱（上海博讯仪器
公司），YB-Ⅱ型澄明度检测仪（天津综科科技公司）等。 500 500
1.2 药品与试剂 400 400
300 300
葡萄糖对照品（批号G173070，纯度99.9％）、果糖对 mAU 2 mAU 2
照品（批号 G173081，纯度 99.6％）、麦芽糖对照品（批号 200 200
100 1 3 4 100 3
G173121，纯 度 98.4％）、异 麦 芽 糖 对 照 品（批 号 5 6 7 1 4 5 6 7
0 0
G173122，纯度 99％）、麦芽三糖对照品（批号 G183037， 0 10 20 30 40 50 60 0 10 20 30 40 50 60
t，min t，min
纯 度 99％）、麦 芽 四 糖 对 照 品（批 号 G173069，纯 度 A.系统适用性试验溶液 B.供试品溶液（批号19061211）
99％）、麦芽五糖对照品（批号G173066，纯度98％）均购 500
自德国Dr. Ehrenstorfer GmbH公司；葡萄糖原料药（中国 400
XR公司，批号19061211、19071811、19101011，纯度大于 mAU 300
98.5％；中国 LX 公司，批号 200217、200506，纯度大于 200
98.5％；中国 CX 公司，批号 A0200508、A0200102，纯度 100
大于99.0％；中国LK公司，批号511911081、511912051， 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
纯度大于 99.0％）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析 t，min
C.空白对照溶液
纯，水为超纯水。
注：1.果糖；2.葡萄糖；3.麦芽糖；4.异麦芽糖；5.麦芽三糖；6.麦芽四
2 方法与结果
糖；7.麦芽五糖
2.1 色谱条件 Note：1. fructose；2. glucose；3. maltose；4. isomaltose；5. malto-
以XBridge Amide（150 mm×4.6 mm，3.5 μm）为色谱 triose；6. maltotetraose；7. maltopentaose
柱，乙腈-水（75 ∶ 25，V/V）为流动相；流速为 0.5 mL/min； 图1 3种待测溶液的高效液相色谱-蒸发光散射检测法
柱温为 30 ℃；进样量为 10 μL；检测器为 ELSD；载气为 色谱图
氮气；气体压力为40 psi；蒸发温度为80 ℃；漂移管温度 Fig 1 HPLC-ELSD chromatograms of 3 kinds of solu-
为80 ℃；增益为100。 tion to be detected

·1242 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 10 中国药房 2021年第32卷第10期