Page 91 - 《中国药房》2021年10期

15～35 min，12％A→15％A；35～75 min，15％A→32％A； 250
75～90 min，32％ A→60％ A；90～130 min，60％ A→ 200 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 12 13 14 15 16 18 19 20
17
70％A）；检测波长为 230 nm；流速为 1.0 mL/min；柱温 11
150
为25 ℃；进样量为10 μL。 mAU
2.1.2 混合对照品溶液的制备 精密称取马钱苷酸、龙 100
胆苦苷、芍药苷、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮 50
Ⅱ A对照品各适量，分别置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解 0
并定容，制成质量浓度分别为 0.300 6、0.503 0、0.499 5、 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130
t，min
0.499 4、0.197 8、0.216 0、0.206 3 mg/mL 的单一对照品 图1 10批筋骨痛消丸的HPLC叠加指纹图谱
贮备液。吸取上述单一对照品贮备液适量，用甲醇配制 Fig 1 HPLC superimposed fingerprint of 10 batches
成马钱苷酸、龙胆苦苷、芍药苷、丹酚酸B、隐丹参酮、丹 of Jingu tongxiao pill
参酮Ⅰ和丹参酮Ⅱ A 质量浓度分别为 45.090、150.900、
100
149.850、149.820、29.670、19.440、30.940 μg/mL 的混合
80
对照品溶液。
2.1.3 供试品溶液的制备 取筋骨痛消丸样品，研磨至 60
细粉，过六号筛（下同）。精密称取细粉 0.4 g，置于 150 mAU 40
mL 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 30 mL，密塞，称定质 6 14
20 1 8
量，超声（频率 45 kHz，功率 600 W）提取 45 min，放至室 2 3 5 7 12 15 19
0 4 910 11 13 16 17 18 20
温；再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，经 R
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130
0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 t，min
2.1.4 精密度试验 取“2.1.3”项下供试品溶液（编号 图2 筋骨痛消丸的HPLC对照指纹图谱
S1）适量，按“2.1.1”项下色谱条件连续进样 6 次。以丹 Fig 2 HPLC control fingerprint of Jingu tongxiao pill
酚酸B为参照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰 2.1.8 相似度评价 采用《中药色谱指纹图谱相似度评
面 积 。 结 果 ，20 个 共 有 峰 相 对 保 留 时 间 的 RSD 为 价系统（2012 版）》对 10 批筋骨痛消丸样品进行相似度
0.02％～0.42％（n＝6），相对峰面积的 RSD 为 0.19％～ 分析。结果，10批样品图谱与对照指纹图谱间的相似度
2.91％（n＝6），表明本方法精密度良好。 均不低于0.980，提示不同批次样品的相似度较高，生产
2.1.5 稳定性试验 取“2.1.3”项下供试品溶液（编号 工艺相对稳定，详见表1。
S1）适量，分别于室温下放置 0、3、6、9、12、24 h 时按 表1 10批筋骨痛消丸的相似度评价结果
“2.1.1”项下色谱条件连续进样测定。以丹酚酸 B 为参 Tab 1 Similarity evaluation results of 10 batches of
照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结 Jingu tongxiao pill
果，20个共有峰相对保留时间的RSD为0.04％～0.16％ 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 R
S1 1.000 0.994 0.983 0.981 0.978 0.988 0.990 0.992 0.979 0.971 0.994
（n＝6），相对峰面积的 RSD 为 0.25％～2.93％（n＝6），
S2 0.994 1.000 0.994 0.992 0.989 0.989 0.992 0.989 0.979 0.972 0.998
表明供试品溶液于室温下放置24 h内稳定性良好。 S3 0.983 0.994 1.000 0.996 0.994 0.984 0.990 0.982 0.973 0.966 0.995
2.1.6 重复性试验 取筋骨痛消丸样品（编号 S1）约 S4 0.981 0.992 0.996 1.000 0.990 0.981 0.985 0.975 0.968 0.959 0.992
S5 0.978 0.989 0.994 0.990 1.000 0.979 0.977 0.976 0.974 0.970 0.992
0.4 g，共 6 份，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按
S6 0.988 0.989 0.984 0.981 0.979 1.000 0.986 0.991 0.980 0.969 0.993
“2.1.1”项下色谱条件进样测定。以丹酚酸B为参照，计 S7 0.990 0.992 0.990 0.985 0.977 0.986 1.000 0.988 0.973 0.961 0.993
算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果，20个 S8 0.992 0.989 0.982 0.975 0.976 0.991 0.988 1.000 0.981 0.970 0.992
S9 0.979 0.979 0.973 0.968 0.974 0.980 0.973 0.981 1.000 0.993 0.987
共有峰相对保留时间的 RSD 为 0.09％～0.73％（n＝6），
S10 0.971 0.972 0.966 0.959 0.970 0.969 0.961 0.970 0.993 1.000 0.980
相对峰面积的 RSD 为 0.66％～2.85％（n＝6），表明本方 R 0.994 0.998 0.995 0.992 0.992 0.993 0.993 0.992 0.987 0.980 1.000
法重复性良好。 2.1.9 共有峰指认 由图2可见，10批筋骨痛消丸样品
2.1.7 HPLC 指纹图谱的建立 取 10 批筋骨痛消丸样 共有 20 个共有峰，通过与混合对照品溶液（图 3A，同一
品，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项 色谱条件下测得）比对，指认共有峰7个，分别为马钱苷
下色谱条件进样测定，记录色谱图。将色谱图导入《中 酸（峰 5）、龙胆苦苷（峰 6）、芍药苷（峰 8）、丹酚酸 B（峰
药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》，选取S1样 14）、隐丹参酮（峰17）、丹参酮Ⅰ（峰18）和丹参酮ⅡA （峰
品色谱图作为参照，将时间窗设置为 0.2 min，经多点校 19）。
正（3点）后自动匹配，生成HPLC叠加指纹图谱，采用中 2.2 含量测定
位数法生成HPLC对照指纹图谱（R）详见图1、图2。 2.2.1 色谱条件 同“2.1.1”项。

中国药房 2021年第32卷第10期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 10 ·1237 ·