Page 98 - 《中国药房》2021年10期

良好。
2.9 重复性试验
取葡萄糖原料药（批号 19061211）约 0.5 g，共 6 份，
按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱
条件进样测定，记录峰面积并按标准曲线法计算样品中
各有关物质的含量。结果，果糖、麦芽糖、异麦芽糖、麦
芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖含量的 RSD 均小于 2.0％
（n＝6），表明方法重复性良好。
2.10 加样回收率试验
精密称取葡萄糖原料药（批号19061211）约250 mg，
共9份，分别置于50 mL量瓶中，精密加入“2.2.2”项下各
有关物质单一对照品贮备液 600、800、1 000 μL，按
“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条
件进样测定，记录峰面积并计算加样加收率，结果见
表2。
2.11 耐用性试验
取“2.2.4”项下系统适用性试验溶液，按“2.1”项下色
谱条件以不同色谱柱[XBridge Amide（150 mm×4.6 mm，
3.5 μm）、Inert Sustain Amide（100 mm×4.6 mm，3 μm）、
Inertsil Amide（150 mm × 4.6 mm，3.5 μ m）]、不 同 柱 温
（25、30、35 ℃）、不同流速（0.4、0.5、0.6 mL/min）进行分
析。结果，当以上条件发生变化时，各色谱峰均符合耐
用性试验的要求，测得各成分含量的 RSD 均小于 2.0％
（n＝3）。
2.12 样品中6种糖类有关物质的测定
取 9 批葡萄糖原料药适量，按“2.2.3”项下方法制备
供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰
面积并按标准曲线法计算样品中6种有关物质的含量。
平行操作3次，取平均值，结果见表3（表中，“－”表示未
检出）。
3 讨论
9.0版《欧洲药典》采用钙型强阳离子交换色谱柱进
行检测，但该色谱柱并不能将麦芽糖和异麦芽糖分
[3]
开 。因此，本课题组拟选择正相色谱柱进行分析。首
先，对氨基色谱柱进行考察，发现因氨基色谱柱所需平
衡时间较长，使得各色谱峰存在保留时间漂移的现象。
有研究认为，酰胺柱以高纯硅胶为基质键合烷基酰胺
基，是对极性化合物具有强保留能力的亲水性色谱
柱 [8－10] 。因此，本课题组对酰胺柱进行考察，发现该色谱
柱可避免氨基色谱柱保留时间漂移和基线不稳定的缺
点，且待测物质尤其是麦芽糖和异麦芽糖可以实现基线
分离。
本课题组前期分别比较了不同流动相系统[甲醇-水
（80 ∶ 20，V/V）、甲醇-0.1％甲酸水溶液（80 ∶ 20，V/V）、乙
腈-水（75 ∶ 25，V/V）、乙腈-0.1％甲酸水溶液（75 ∶ 25，
V/V）]的分离效果。结果，以 0.1％甲酸水溶液作为水相
时，各待测成分色谱峰存在不同程度的拖尾现象，峰形
较差；以乙腈-水为流动相时，各色谱峰分离度更好且优
于甲醇-水，因此本研究选择乙腈-水为流动相。
·1244 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 10
表2 6种糖类有关物质的加样回收率试验结果（n＝9）
Fig 2 Chromatograms of destructive test for carbohy-
drate related substances（n＝9）
称样量， 已知量， 加入量， 测得量， 加样回收率， 平均加样回收率， RSD，
待测有关物质
mg μg μg μg ％ ％ ％
果糖 250.70 458.78 359.28 803.22 95.87 97.12 1.04
251.21 459.71 359.28 811.34 97.87
250.62 458.63 359.28 807.01 96.96
252.39 461.87 479.04 921.15 95.87
251.28 459.84 479.04 921.28 96.33
250.81 458.98 479.04 931.27 98.59
251.40 460.06 598.80 1 040.65 96.96
251.00 459.33 598.80 1 041.29 97.19
250.31 458.07 598.80 1 047.46 98.43
麦芽糖 250.70 789.71 593.76 1 369.36 97.62 97.66 1.20
251.21 791.31 593.76 1 359.33 95.66
250.62 789.45 593.76 1 369.17 97.63
252.39 795.03 791.68 1 559.21 96.53
251.28 791.53 791.68 1 561.28 97.23
250.81 790.05 791.68 1 568.15 98.28
251.40 791.91 989.60 1 762.35 98.06
251.00 790.65 989.60 1 778.64 99.84
250.31 788.48 989.60 1 759.14 98.09
异麦芽糖 250.70 779.68 595.14 1 361.81 97.81 97.41 1.04
251.21 781.26 595.14 1 357.52 96.83
250.62 779.43 595.14 1 351.42 96.11
252.39 784.93 793.52 1 562.15 97.95
251.28 781.48 793.52 1 546.12 96.36
250.81 780.02 793.52 1 548.18 96.80
251.40 781.85 991.90 1 745.41 97.14
251.00 780.61 991.90 1 760.08 98.75
250.31 778.46 991.90 1 760.15 98.97
麦芽三糖 250.70 473.82 358.44 820.81 96.80 97.46 1.25
251.21 474.79 358.44 821.52 96.73
250.62 473.67 358.44 814.42 95.06
252.39 477.02 477.92 945.15 97.95
251.28 474.92 477.92 947.12 98.80
250.81 474.03 477.92 939.18 97.33
251.40 475.15 597.40 1 056.41 97.30
251.00 474.39 597.40 1 060.08 98.04
250.31 473.09 597.40 1 065.15 99.11
麦芽四糖 250.70 293.32 241.92 524.81 95.69 96.86 0.83
251.21 293.92 241.92 531.52 98.22
250.62 293.23 241.92 526.42 96.39
252.39 295.30 322.56 610.15 97.61
251.28 294.00 322.56 604.12 96.14
250.81 293.45 322.56 607.18 97.26
251.40 294.14 403.20 682.41 96.30
251.00 293.67 403.20 684.08 96.83
250.31 292.86 403.20 685.15 97.29
麦芽五糖 250.70 443.74 353.34 785.81 96.81 97.22 1.01
251.21 444.64 353.34 781.52 95.34
250.62 443.60 353.34 788.42 97.59
252.39 446.73 471.12 901.15 96.46
251.28 444.77 471.12 908.12 98.35
250.81 443.93 471.12 903.18 97.48
251.40 444.98 588.90 1 025.41 98.56
251.00 444.27 588.90 1 015.08 96.93
250.31 443.05 588.90 1 017.15 97.49
中国药房 2021年第32卷第10期