Page 107 - 《中国药房》2021年8期

1.2 4-HNE检测 料以例数或率表示，采用χ 检验；计量资料以x±s表示，
2
所有患者均于入院当天采用抗凝管采集静脉血 1 采用方差分析。以 Hardy-Weinberg 遗传平衡检验研究
mL，以5 000 r/min离心1 min，分离血浆。采用酶联免疫 对象的人群代表性。以差异有统计学意义的指标为自
吸附测定法以 MB-580 型多功能酶标分析仪（深圳市汇 变量、缺血性卒中入院时4-HNE浓度和缺血性卒中复发
松科技发展有限公司）检测药物干预前患者血浆中 为因变量，采用多元线性回归分析探讨引起4-HNE浓度
4-HNE浓度，人4-HNE检测试剂盒购自上海邦奕生物科 升高的因素；采用条件 Logistic 分析探讨缺血性卒中复
技有限公司（批号LOT201708）；所有观察组患者于药物 发的独立危险因素。P＜0.05为差异有统计学意义。
干预 14 天后同法操作，检测药物干预后血浆中 4-HNE 2 结果
浓度。所有操作均严格按试剂盒说明书进行。 2.1 两组患者入院时血浆中 4-HNE 浓度和 TOAST 分
1.3 DNA提取、扩增和测序 型比较
所有患者均于入院当天采集静脉血1 mL，采用血液 观察组入院时患者血浆中4-HNE浓度、大动脉粥样
DNA小量提取试剂盒（山东诺丁生物科技有限公司，批 硬化患者比例均显著高于对照组（P＜0.05），详见表2。
号 D3018-03，内含 Buffer AL 6 mL、Buffer GW1 12 mL、 表2 两组患者入院时血浆中4-HNE浓度和TOAST分
Buffer GW2 6 mL、Protease K 12 mg、Protease dissolve 型比较
buffer 1 mL、Buffer AE 3 mL，自带基因组 DNA 吸附小 Tab 2 Comparison of plasma 4-HNE concentration
柱）并按试剂盒说明书操作提取DNA。 at admission and TOAST genotype between 2
将提取得到的DNA加入事先设计并委托北京华大 groups
基因研究中心合成的 ALDH2 rs671 的上、下游引物（上 TOAST分型
游引物：5′-TCATGCCATGGCAACTCCAGC-3′；下游引 组别 n 4-HNE（x±s）， 大动脉粥样硬化，小血管闭塞， 心源性脑栓塞， 其他原因卒中，不明原因卒
ng/mL
物：5′-TGATCCCCAGCAGGTCCTGAA-3′），采用 PTC- 例（％） 例（％） 例（％） 例（％） 中，例（％）
对照组 97 12.07±2.61 18（18.56） 30（30.93） 8（8.25） 0（0.00） 41（42.27）
100 型聚合酶链式反应（PCR）仪（美国 MJ-Research 公
观察组 97 16.85±3.18 ＊ 31（31.96） ＊ 22（22.68） 3（3.09） 1（1.03） 40（41.24）
司）进行扩增。反应体系总体积为 60 μL，含 2×Bench
＊
注：与对照组比较，P＜0.05
Top Tap Master Mix 30 μL，上、下游引物各加2.4 μL，模 Note：vs. control group， P＜0.05
TM
＊
板DNA 3 μL，并用灭菌蒸馏水补足60 μL。反应条件为 2.2 两组患者ALDH2基因多态性比较
94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃ 两组患者共测得ALDH2基因型3种，其测序图谱见
延伸 45 s，30 个循环；72 ℃再延伸 5 min。扩增产物于 图1。
4 ℃保存，并送至北京华大基因研究中心进行测序。
1.4 TOAST分型
所有患者均于入院当天根据临床特点、影像学、实
验室检查及哈佛卒中中心和美国国家精神疾病中心的
综合分型标准（即TOAST）将缺血性卒中分为5个类型，
包括大动脉粥样硬化、小血管闭塞、心源性脑栓塞、其他
[9]
原因卒中、不明原因卒中 。
1.5 药物干预对4-HNE浓度的影响 A.野生纯合型（ALDH2*1）
将观察组患者按分层随机抽样法分为常规治疗组
（49 例）和药物干预组（48 例）。其中，常规治疗组男性
43例、女性6例，年龄（66.21±4.20）岁；药物干预组男性
44 例、女性 4 例，年龄（64.70±5.19）岁。两组患者的性
别、年龄等基本资料比较，差异均无统计学意义（P＞ B.突变杂合型（ALDH2*1/2）
0.05），具有可比性。常规治疗组患者给予包括脑血流再
通、改善循环、控制血压、维持血糖、治疗高脂血症和心
律失常等常规治疗；药物干预组在常规治疗的基础上给
予注射用谷胱甘肽（重庆药友制药有限责任公司，国药
准字 H19991067，规格 0.6 g）1.8 g，每天 1 次，静脉注射。
两组患者的疗程均为14天。 C.突变纯合型（ALDH2*2）
1.6 统计学方法 图1 ALDH2基因测序图谱
采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析。计数资 Fig 1 ALDH2 genetic sequencing maps

中国药房 2021年第32卷第8期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 8 ·993 ·