Page 20 - 《中国药房》2020年22期

showed significant inhibitory effect on the release of NO，0.05，0.1，0.25，0.5 mg/mL raw A. kusnezoffii and A. kusnezoffii
processed with T. chebula showed significant inhibitory effect on the release of TNF-α and IL-6 in RAW264.7 cell（P＜0.05 or P＜
0.01）. The inhibitory effects of A. kusnezoffii processed with T. chebula at the same concentration on the release of NO was better
than that of raw A. kusnezoffii，but poorer than raw A. kusnezoffii in the inhibitory effects on the release of TNF-α and IL-6.
CONCLUSIONS：The toxicity of A. kusnezoffii can be reduced after processed with T. chebula，especially the toxicity of it in
medium or high concentration and short-term use is lower than that of raw A. kusnezoffii. At the same time，the anti-inflammatory
effect of A. kusnezoffii processed with T. chebula is comparable to that of raw A. kusnezoffii at the same concentration.
KEYWORDS Raw Aconitium kusnezoffii； Aconitium kusnezoffii processed with Terminalia chebula； Cytotoxicity； Anti-
inflammatory effects；H9c2 cell；RAW264.7 cell

草乌 Aconiti Kusnezoffii Radix 为毛茛科植物北乌 A. kusnezoffii Reichb.的干燥块根和使君子科植物诃子
头 Aconitum kusnezoffii Reichb.的干燥块根，具有祛风除 T. chebula Retz.的干燥成熟果实的去核品。青链霉素混
湿、温经止痛的功效，可用于风寒湿痹、关节疼痛、心腹 合液（美国 Caisson Labs 公司，批号：12181006）；DMEM
冷痛、寒疝作痛及麻醉止痛，有大毒 。草乌是毒效并存 高 糖 培 养 基（批 号 ：0032019）、胎 牛 血 清（批 号 ：
[1]
的药材，其在发挥抗炎、镇痛等作用的同时，往往会因使 AB20171102S）、胰蛋白酶（批号：0052419）、磷酸盐缓冲
用不当或者剂量过大而产生较强的毒副作用，其主要毒 液（PBS，pH＝7.4，批号：0012819）、LPS（批号：L2880）均
[2]
性靶器官为心脏，以心律失常等症状最为常见 。因此， 购自美国 Sigma 公司；CCK-8 试剂（批号：NV547）、二甲
临床上常通过炮制或者配伍以达到减毒的目的 [3-4] 。草 基亚砜（批号：1101G031）均购自北京索莱宝科技有限公
乌有多种炮制方法，诃子汤制为蒙医炮制草乌的特色方 司；Griess试剂盒（北京拜尔迪生物技术有限公司，批号：
[6]
[5]
法 ，蒙医中有“诃子解草乌毒”的说法 。诃子 Chebu- 106012）；肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫吸附测定法
lae Fructus为使君子科植物诃子Terminalia chebula Retz. （ELISA）检测试剂盒（批号：A282H91224）、白细胞介素
或绒毛诃子 Terminalia chebula Retz.var. tomentella Kurt. 6（IL-6）ELISA 检 测 试 剂 盒（批 号 ：A206H91042）、
[1]
的干燥成熟果实 。本课题组前期研究发现，诃子中的 Hoechst 33258 染色液（批号：C1018）均购自上海碧云天
鞣质类成分可以有效避免草乌中双酯型生物碱的水解 生物技术有限公司；其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
或流失，进而减缓双酯型生物碱的水解速度，使其缓慢 1.3 细胞
地发挥毒性作用，故诃子制草乌的半数致死浓度（LD50 ） 大鼠心肌细胞 H9c2 和小鼠巨噬细胞 RAW264.7 均
高于生草乌 [7-8] 。可见，诃子汤炮制能降低草乌的毒性， 购自于北京协和细胞资源中心。
但并不是通过降低剧毒草乌中双酯型生物碱的含量来 2 方法
实现的。为了进一步明确生草乌经诃子汤炮制后减毒 2.1 诃子制草乌的制备
存效的原理，本研究比较了不同浓度生草乌和诃子制草 参考《内蒙古蒙成药标准》，按本课题组前期制定的
乌作用不同时间对 H9c2 细胞的毒性，同时利用经典炎 参数制备诃子制草乌 [9-10] 。按照草乌-诃子质量比2 ∶ 1的
症细胞模型[脂多糖（LPS）诱导的 RAW264.7 巨噬细胞 比例称取药材，先取诃子肉，加适量水浸泡 1 h，回流煎
炎症模型]探讨生草乌和诃子制草乌的抗炎作用，从量- 煮 1 h，滤过得诃子汤（每克诃子肉可得诃子汤约 0.8
毒-时关系的角度探讨诃子汤制法对草乌的减毒作用， mL）；再取生草乌，用上述诃子汤浸泡3 d，至口尝微有麻
以期进一步明确诃子制草乌炮制前后的药效变化，为该 舌感时取出，阴干，即得诃子制草乌。
炮制方法及炮制品的开发和应用提供参考。 2.2 样品预处理
1 材料 分别将生草乌、诃子制草乌粉碎后，过三号筛，称取
1.1 仪器 粉末约2 g，精密称定，分别置于100 mL具塞锥形瓶中，
Thermo 3111型CO2培养箱（美国Thermo Fisher Sci- 精密加入甲醇 50 mL，称定质量，在 25 ℃下超声（功率：
entific公司）；SPECTROstar Nano型全波长酶标仪（上海 300 W，频率：40 kHz）处理 60 min，冷却至室温，再次称
微百科技发展有限公司）；BY-R20 型低温高速离心机 定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，将滤液用
（北京白洋医疗器械有限公司）；Nikon Eclipse Ts2 型常 氮气流吹至干，即得。
规倒置显微镜（日本 Nikon 公司）；MTN-5800 型氮吹仪 2.3 生草乌和诃子制草乌对H9c2细胞的毒性
（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；ISO9001 型电子分析 2.3.1 细胞抑制率 采用 CCK-8 法检测。取对数生长
天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司）。 期的H9c2细胞，经0.25％胰蛋白酶消化后，用含10％胎
1.2 药品与试剂 牛血清的 DMEM 高糖培养基（以下简称“完全培养
生草乌饮片（批号：311271）购自北京华邈中药工程 基”）调整细胞密度为1×10 个/mL，接种于96孔板中，每孔
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技术开发中心，诃子肉饮片（批号：180231）购自北京鹤 100 μL。在37 ℃、5％CO2的培养箱中培养24 h（培养条
延龄药业发展有限公司，经北京中医药大学中药资源 件下同）后，将细胞随机分为空白组和生草乌/诃子制草
与鉴定系王晶娟教授鉴定分别为毛茛科植物北乌头 乌不同浓度给药组。弃去上清液，各给药组细胞分别加

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