Page 15 - 《中国药房》2020年22期
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[12]
        品混匀；（2）大体积样品，取 250～500 g 样品混匀并切                    用性考察，USP43要求适用性的菌数回收率＞70％ ，其
        碎；（3）单个样品不少于100 g，至少取5个或500 g，切碎                   他 3 部药典均采用回收率因子为 2 的规定               [10-11，13] 。各药
        后混匀；（4）以溶液或制剂形式的样品混匀后直接取                           典对TAMC计数和TYMC计数的培养温度要求均一致，
        样。从上述混匀的样品中取 10 g 或 10 mL 作为样品检                    但对培养时间和菌落适宜计数范围的规定略有不同。
                              [13]
        验。ChP2020“通则 1108” 则指出，“除另有规定外，参                   1.4 耐热菌计数
        照药材和饮片取样法（‘通则0211’）抽取试验样品，大包                           中药饮片在服用前一般需经加热处理，虽然加热可
        装饮片每批抽取 100～500 g，混匀；独立小包装饮片按                      以减少样品的生物负载、降低致病风险，但加热处理并
        装量抽取100～500 g的包装数；检验量除另有规定外均                       不能杀灭中药饮片中的耐热菌，同时容易导致产品腐败
        为25 g或25 mL，贵重品种或密度较小品种可酌减”。                       变质及生物毒素累积。因此，ChP2020增加了耐热菌计
        1.2 菌种和培养基选择                                       数项目，其定义为“置水浴（98～100 ℃）30 min处理后按
                                                                                               [13]
            在菌种选择方面，USP43列出了包含金黄色葡萄球                       需氧菌总数测定方法检出的微生物总称” 。该方法针
        菌 ATCC 6538、大肠埃希菌 ATCC 8739、枯草芽孢杆菌                 对的是煎煮类中药饮片，评估了该类中药饮片在加热处
        ATCC 6633、白色念珠菌ATCC 10231和巴西曲霉ATCC                 理后残留微生物的情况；而其他3部药典均未收载相关
        16404在内的5种微生物用于培养基适用性和方法适用                         方法。
              [12]
        性检查 。EP10.0 和 JP17 将大肠埃希菌更换为铜绿假                    2 控制菌检查
        单胞菌ATCC 9027，并对上述各菌种给出了英国食品工                           控制菌检查是中药饮片检查的重要项目。4部药典
        业与海洋细菌菌种保藏中心（National Collections of In-           共同规定的控制菌检查项目有耐胆盐革兰阴性菌、大肠
        dustrial，Food and Marine Bacterial，NCIMB）、法国巴斯     埃希菌和沙门菌       [10-13] ，其检查方法比较见表2。需要指出
        德研究所菌种保藏中心（Collection de L’Institut Pasteur        的是，USP43将耐胆盐革兰阴性菌归在微生物计数检查
        Of Institut Pasteur，CIP）和日本生物资源中心（NITE Bio-       “2021”。此外，在USP43和JP17中增加了金黄色葡萄球
        logical Resource Center，NBRC）的等效菌株编号，该规            菌的检查方法；USP43 还补充了梭菌的检查方法，并最
        定与人用药品注册技术要求国际协调会议（Internation-                    早提出了不可接受微生物风险评估的理念。此外，
        al Council for Harmonization，ICH）的协调案一致    [10-11] 。  USP43 在中药饮片控制菌检查法中仅介绍了培养基适
        ChP2020的菌种种类与EP10.0和JP17相同，但仅允许使                   用性试验原理，并未明确具体操作方法，也未要求开展
        用CMCC菌种 。                                          方法适用性试验；而 EP10.0、JP17 和 ChP2020 均对培养
                    [13]
            在培养基的选择上，除采用 TSA 培养基和 SDA 培                    基适用性试验和方法适用性试验进行了较为详细的
        养基作为常规计数培养基外，考虑到中药饮片常常存在                           介绍。
        较多的不溶性物质和较高的细菌、真菌污染概率，上述                           2.1  耐胆盐革兰阴性菌
        因素均有可能影响TAMC和TYMC计数结果，JP17还规                           在前处理中，与其余药典采用TSB培养基作为稀释
        定可在 TSA 培养基中可添加一定浓度的 TTC 以用于区                      液不同，USP43 增加了 pH 7.2 PBS 作为稀释液。虽然，
        分细菌菌落和其他杂质；如真菌生长影响样品TAMC计                          各药典对样品复苏时间的要求略有不同，但都要求至少
        数结果，可在TSA培养基中添加两性霉素B以抑制真菌                          复苏 2 h。在增菌阶段，EP10.0 采用了 0.1、0.01、0.001、
        生长；如真菌在含抗生素的 SDA 培养基中蔓延生长，则                        0.000 1 g（或 mL）等 4 个供试品接种浓度，分别接种至
        可添加玫瑰红成分以抑制蔓延现象 。ChP2020规定当                        MEEB培养基中，使该方法可检测的耐胆盐革兰阴性菌
                                      [11]
        TYMC 计数受细菌生长影响时，可使用含抗生素（如氯                         数量达到 1×10 CFU/g（或 CFU/mL）。与其他药典采用
                                                                        4
        霉素、庆大霉素）的SDA培养基或其他选择性培养基（如                         0.1、0.01、0.001 g（或 mL）3 个供试品接种浓度的方法相
                           [13]
        玫瑰红钠琼脂培养基） 。但USP43和EP10.0均未明确                      比，EP10.0方法的检测上限提高了1个数量级。各药典
        提及相关要求。                                            在选择性分离所用方法一致，均采用 VRBGA 培养基识
        1.3 微生物计数方法                                        别可疑菌落，但培养温度和培养时间略有差别。
            在微生物计数方法上，EP10.0和JP17均规定了4种                    2.2 大肠埃希菌
        计数方法，分别为膜过滤法、平皿计数法（倾注、涂布）以                             EP10.0 和 JP17 分别规定了大肠埃希菌的定性和定
        及 MPN 法  [10-11] ；USP43 没有规定平皿计数法（倾注） ，            量检验方法，USP43和ChP2020则仅规定了定性检验方
                                                     [13]
                                           [13]
        而 ChP2020 仅规定了平皿计数法（倾注） 。由于 MPN                    法。在定性检验方法中，各药典检测原理一致，均将供
        法的准确性较低，对真菌的计数极不可靠，因此MPN法                          试液经 TSB 培养基增菌后，接种至麦康凯肉汤培养基
        仅适合于其他计数方法都不适用的情况，且仅能用于                            中，再经选择性培养基分离。其中，USP43 使用麦康凯
        TAMC计数。在方法适用性方面，检验前应开展方法适                          琼脂培养基分离培养18～24 h，并可选用EMB培养基进


        中国药房    2020年第31卷第22期                                            China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 22  ·2697 ·
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