Page 19 - 《中国药房》2020年22期

·药学研究·

生草乌和诃子制草乌细胞毒性及抗炎作用的比较研究 Δ

支美汝 ，韩 舒，刘凯洋，韩喜桃，唐雅楠，刘子琴，王宏月，李 飞，杜 红（北京中医药大学中药学院，北京
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100029）

中图分类号 R28 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）22-2701-05
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.22.03

摘 要 目的：比较生草乌和诃子制草乌的细胞毒性及抗炎作用。方法：以大鼠心肌细胞H9c2为对象，采用CCK-8法检测0.5、1、
2、4、6、8、10 mg/mL生草乌和诃子制草乌作用4、8、12、24 h对细胞抑制率的影响，采用Hoechst 33258染色法观察2、4、6 mg/mL生
草乌和诃子制草乌作用 24 h 对细胞形态学特征的影响。以小鼠巨噬细胞 RAW264.7 为对象，采用 CCK-8 法检测 0.05、0.1、0.25、
0.5、0.75、1、1.5、2 mg/mL 生草乌和诃子制草乌作用 24 h 对细胞存活率的影响，采用酶联免疫吸附试验法检测 0.05、0.1、0.25、0.5
mg/mL生草乌和诃子制草乌对LPS致RAW264.7炎症细胞中一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）释放的
影响。结果：当质量浓度为0.5、1 mg/mL时，生草乌和诃子制草乌对H9c2细胞几乎均无抑制作用；当质量浓度为2 mg/mL时，诃子
制草乌在各时间点对H9c2细胞的抑制率均显著高于生草乌（P＜0.05或P＜0.01），且作用24 h的细胞荧光强度虽强于生草乌，但
其细胞核完整；当质量浓度为4～10 mg/mL时，诃子制草乌在各时间点（除8、10 mg/mL作用24 h外）对H9c2细胞的抑制率均显著
低于生草乌（P＜0.05或P＜0.01），且4、6 mg/mL生草乌组细胞的荧光强度强于诃子制草乌组，同时生草乌组的细胞核破碎现象更
为严重。0.05～0.5 mg/mL的生草乌和诃子制草乌对RAW264.7细胞均无毒性，0.25、0.5 mg/mL的生草乌和0.1、0.25、0.5 mg/mL的
诃子制草乌对RAW264.7炎症细胞中NO 的释放以及0.05、0.1、0.25、0.5 mg/mL的生草乌和诃子制草乌对RAW264.7炎症细胞中
TNF-α、IL-6的释放均有显著的抑制作用（P＜0.05或P＜0.01），其中相同质量浓度下诃子制草乌对NO释放的抑制作用优于生草
乌，对TNF-α、IL-6释放的抑制作用弱于生草乌。结论：草乌经诃子汤炮制后毒性有所降低，尤其是以中或高浓度、短期内使用的
毒性低于生草乌。同时，诃子制草乌的抗炎作用与同浓度生草乌相当。
关键词 生草乌；诃子制草乌；毒性；抗炎；H9c2细胞；RAW264.7细胞

Comparative Study of Cytotoxicity and Anti-inflammatory Effects between Raw Aconitium kusnezoffii and
Aconitium kusnezoffii Processed with Terminalia chebula
ZHI Meiru，HAN Shu，LIU Kaiyang，HAN Xitao，TANG Yanan，LIU Ziqin，WANG Hongyue，LI Fei，DU Hong
（School of Chinese Materia Medica，Beijing University of TCM，Beijing 100029，China）

ABSTRACT OBJECTIVE：To compare cytotoxicity and anti-inflammatory effects of raw Aconitium kusnezoffii and A. kusnezoffii
processed with Terminalia chebula. METHODS：Using H9c2 cardiomyocytes isolated from rat as subjects，CCK-8 assay was used
to detect the effects of 0.5，1，2，4，6，8，10 mg/mL raw A. kusnezoffii and A. kusnezoffii processed with T. chebula on cell
inhibition rate after cultured for 4，8，12，24 h. Hoechst 33258 staining was used to observe the effects on cell morphology
characteristics after treated with 2，4，6 mg/mL raw A. kusnezoffii and A. kusnezoffii processed with T. chebula. Using macrophages
RAW264.7 cells as subjects，CCK-8 assay was used to detect the effects of 0.05，0.1，0.25，0.5，0.75，1，1.5，2 mg/mL raw A.
kusnezoffii and A. kusnezoffii processed with T. chebula on cell survival rate after cultured for 24 h. ELISA assay was used to detect
the effects of 0.05，0.1，0.25，0.5 mg/mL raw A. kusnezoffii and A. kusnezoffii processed with T. chebula on the release of NO，
TNF-α and IL-6 in RAW264.7 inflammation cells induced by LPS. RESULTS：When the mass concentration was 0.5，1 mg/mL，
neither raw A. kusnezoffii and A. kusnezoffii processed with T. chebula had no inhibitory effect on H9c2 cells. When the mass
concentration was 2 mg/mL，the inhibitory effects of A. kusnezoffii processed with T. chebula on H9c2 cells was higher than that of
raw A. kusnezoffii （P＜0.05 or P＜0.01）；fluorescence intensity of cells treated for 24 h was stronger than that of raw A.
kusnezoffii，but its nucleus was intact. When the mass concentration was 4-10 mg/mL，the inhibitory rate of A. kusnezoffii
processed with T. chebula on H9c2 cells at different time points（except for 24 h culture of 8，10 mg/mL）was significantly lower
than raw A. kusnezoffii（P＜0.05 or P＜0.01）. The characteristics of cell morphology also showed that the fluorescence intensity of
raw A. kusnezoffii group at 4，6 mg/mL was stronger than that of A. kusnezoffii processed with T. chebula group，and the cell
nucleus fragmentation was more serious in the raw A.
Δ 基 金 项 目 ：国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目（No.81774004，
No.81973479） kusnezoffii group. 0.05-0.5 mg/mL raw A. kusnezoffii and A.
＊硕士研究生。研究方向：中药炮制。E-mail：zmr6822@163.com kusnezoffii processed with T. chebula had no toxicity to
# 通信作者：教授，博士生导师，博士。研究方向：中药炮制。E- RAW264.7 cells. 0.25，0.5 mg/mL raw A. kusnezoffii and 0.1，
mail：duhong@vip.163.com 0.25， 0.5 mg/mL A. kusnezoffii processed with T. chebula

中国药房 2020年第31卷第22期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 22 ·2701 ·