Page 31 - 2020年21期

参附注射液对LPS诱导的RAW264.7细胞HMGB1核转位的干预

作用 Δ

艾 飞 ，刘 霞 ，黎 晖 ，褚春薇 ，陈向云 ，郭俊峰 ，杨 毅 ，梅丽艳 ，苗纪飞 ，温 泉 ，叶 森（1.贵州
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中医药大学第二临床医学院，贵阳 550025；2.贵州中医药大学基础医学院，贵阳 550025；3.广州中医药大学
基础医学院，广州 510006）
中图分类号 R965.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）21-2585-07
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.21.05
摘 要 目的：探讨参附注射液（SFI）对脂多糖（LPS）诱导的巨噬细胞中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）核转位的干预作用。方法：
以经LPS诱导的小鼠单核巨嗜细胞RAW264.7为对象，以组蛋白去乙酰化酶抑制剂RGFP966为阳性对照，在CCK-8法筛选给药剂
量的基础上，采用免疫荧光法观察低、中、高剂量（3、6、12 μL/mL）SFI对细胞中HMGB1核转位的影响，采用实时荧光聚合酶链式
反应法检测细胞中HMGB1 mRNA的表达情况；采用Western blotting法检测细胞中HMGB1、Toll样受体4（TLR4）的表达情况，并
比较细胞胞核、胞浆中HMGB1的表达情况；采用酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中HMGB1、白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏
死因子α（TNF-α）水平。结果：在空白对照组中，HMGB1主要定位于细胞核；经LPS诱导后，HMGB1由细胞核向胞浆迁移。与空
白对照组比较，LPS组细胞中HMGB1 mRNA及其蛋白、TLR4的蛋白表达量以及上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α水平均显著升高
（P＜0.01）；细胞胞核中HMGB1的蛋白表达量显著降低，而胞浆中HMGB1的蛋白表达量显著升高（P＜0.01）。经SFI作用后，各
给药组细胞HMGB1的核移位及分泌均受到不同程度的抑制；与LPS组比较，各给药组细胞中HMGB1 mRNA及其蛋白的表达量，
阳性对照组和 SFI 中、高剂量组细胞中 TLR4 的蛋白表达量以及各给药组细胞上清液中 HMGB1、IL-1β、TNF-α水平均显著降低
（P＜0.01）；阳性对照组和SFI中、高剂量组细胞胞核中HMGB1的蛋白表达量均显著升高，而各给药组细胞胞浆中HMGB1的蛋白
表达量均显著降低（P＜0.01）。结论：SFI可能通过抑制RAW264.7细胞中HMGB1的核移位及分泌出胞，避免炎症通路的激活和
炎症因子的产生，从而发挥减轻LPS致炎症反应的作用。
关键词 参附注射液；RAW264.7细胞；高迁移率族蛋白B1；炎症因子；核转位

Intervention Effect of Shenfu Injection on the Nuclear Translocation of HMGB1 in LPS-induced
RAW264.7 Cells
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AI Fei ，LIU Xia ，LI Hui ，CHU Chunwei ，CHEN Xiangyun ，GUO Junfeng ，YANG Yi ，MEI Liyan ，MIAO
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Jifei ，WEN Quan ，YE Sen（1. The Second Clinical Medical College，Guizhou University of TCM，Guiyang
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550025，China；2. School of Basic Medical Sciences，Guizhou University of TCM，Guiyang 550025，China；
3. School of Basic Medical Sciences，Guangzhou University of TCM，Guangzhou 510006，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To investigate the intervention effect of Shenfu injection（SFI）on the nuclear translocation of high
mobility group box 1（HMGB1） in lipopolysaccharide （LPS）-induced RAW264.7 cells. METHODS： Using LPS-induced
RAW264.7 cells as objects，the histone deacetylase inhibitor RGFP966 as positive control，CCK-8 assay was used to screen drug
dosage，and the effects of low，medium and high doses（3，6，12 μL/mL）of SFI on HMGB1 nuclear translocation in RAW264.7
cells were observed by immunofluorescence method；mRNA expression of HMGB1 in RAW264.7 cells were detected by real time
fluorescent PCR. Western blotting assay was used to determine protein expression of HMGB1 and Toll-like receptor 4（TLR4）；the
expression of HMGB1 were compared between nucleus and cytoplasm. The levels of HMGB1，IL-1β and TNF-α in supernatant of
cells were detected by ELISA. RESULTS：In blank control group，HMGB1 was mainly located in the nucleus；after LPS
induction， HMGB1 migrated from nucleus to cytoplasm.
Δ 基 金 项 目 ：国 家 自 然 科 学 基 金 地 区 科 学 基 金 资 助 项 目 Compared with blank control group， mRNA and protein
（No.81760738）
expression of HMGB1， protein expression of TLR4 in
＊讲师，硕士。研究方向：中医药治疗炎性相关疾病的物质基础
RAW264.7 cells as well as the levels of HMGB1，IL-1β and
及分子机制。E-mail：afaifei@163.com
# 通信作者：研究员，博士生导师，博士。研究方向：中医药治疗 TNF-α in supernatant of cells were increased significantly in
炎性相关疾病的物质基础及分子机制。E-mail：lihui@gzucm.edu.cn LPS group（P＜0.01）. The protein expression of HMGB1 was

中国药房 2020年第31卷第21期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 21 ·2585 ·