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中，可明显降低其在机体其余部位的分布，从而起到降                            蛋黄卵磷脂（EPC，日本 NOF 公司，纯度：＞98％）；聚乙
                         [4]
        低药物毒性的作用 。薯蓣皂苷是一种天然化合物，广                            二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺 2000（DSPE-PEG2000，日
        泛存在于薯蓣科、百合科、石竹科等植物中，具有很高的                           本 NOF 公司）；胆固醇（批号：F0119A）、SRB（批号：
        药用价值，常作为抗肿瘤转移佐剂应用于癌症治疗研究                            A0702A）均购自大连美仑生物技术有限公司；pH 7.4 磷
        中 。研究表明，薯蓣皂苷可通过诱导阻滞细胞周期 S                           酸缓冲盐溶液（PBS，北京索莱宝科技有限公司，批号：
          [5]
        期、通过Caspase途径诱导癌细胞凋亡、抑制细胞分裂增                        1022Q021）；DSPE-PEG2000-GGPFV由辽宁中医药大学药
        殖等方式干预癌细胞的生命过程               [6-8] ；同时，其可破坏癌        剂实验室靶向研究室合成；DMEM培养基、胰蛋白酶、青
        细胞形成的血管生成拟态，抵抗癌细胞侵袭转移，从而                            链霉素双抗、胎牛血清均购自美国Gibco公司；水为娃哈
                    [9]
        起到抗癌效果 。但是，薯蓣皂苷的水溶性差，导致其生                           哈牌纯净水，其余试剂均为分析纯或色谱纯。
        物利用度较低，而将其包载在脂质体的磷脂双分子层中                            1.3 细胞
                            [9]
        可有效解决这一问题 。Gly-Gly-Pro-Phe-Val-Tyr-Leu-                 人乳腺癌 MDA-MB-435S 细胞购于中国医学科学
        Ile（GGPFVYLI，简称为“GGPFV”）作为一种穿膜肽，具                   院基础医学研究所，在含 10％胎牛血清和 1％青链霉素
        有水溶性好、可裂解性低、转运能力高的优点；并且其穿                           双抗的DMEM培养基中，于5％CO2、37 ℃条件下培养，
        透作用无饱和性，能有效地协助药物进入细胞，故将其                            备用。
        修饰在脂质体表面，可增强脂质体的内化效率，从而更                            2 方法与结果
                        [10]
        好地发挥药物疗效 。                                          2.1 脂质体的制备
            脂质体是以磷脂双分子层为基本骨架的类细胞膜                               通过薄膜分散法和硫酸铵水化法制备GGPFV修饰
        结构，具有较好的生物相容性。本研究通过薄膜分散法                            的柔红霉素/薯蓣皂苷脂质体。精密称取胆固醇、EPC、
        联合硫酸铵水化法将柔红霉素包载在脂质体的亲水性                             DSPE-PEG2000、DSPE-PEG2000-GGPFV、薯蓣皂苷各适量，
        内核中，将薯蓣皂苷包载在脂质体的疏水性磷脂双分子                            以甲醇溶解后置于圆底烧瓶中，超声（功率：200 W，频
        层之间，并在脂质体表面修饰 GGPFV，制备了 GGPFV                       率：40 kHz，下同）混匀，于40 ℃水浴下减压旋蒸，待圆底
        修饰的柔红霉素/薯蓣皂苷脂质体，以改善柔红霉素对机                           烧瓶中形成一层薄膜后向其中加入 250 mmol/L 的硫酸
        体的毒副作用，并提高薯蓣皂苷的溶解度；同时，采用                            铵水溶液 5 mL，待薄膜溶解完全后将混悬液转移至 10
        Box-Behnken响应面法优选了GGPFV修饰的柔红霉素/                     mL EP管中。将盛有混悬液的EP管置于冰水浴中超声
        薯蓣皂苷脂质体的最佳处方，并通过磺酰罗丹明 B                             10 min（超声间隔 5 s，单次超声时长 10 s），以防止因过
        （SRB）法考察了所制脂质体制剂对人乳腺癌 MDA-                          热导致脂质体破裂。待超声结束后，将脂质体混悬液连
        MB-435S细胞的毒性作用，旨在初步考察各脂质体对乳                         续 2 次在 0.22 μm 聚碳酸酯膜上挤出，以使微粒大小均
        腺癌细胞的抑制作用，同时评价 GGPFV 在脂质体表面                         一化。将挤出后的脂质体装入透析袋，于500 mL PBS
        修饰的优势。                                              中在磁力搅拌下避光透析 24 h，每隔 8 h 更换 1 次透析
        1 材料                                                液。精密称取柔红霉素对照品适量置圆底烧瓶中，以甲
        1.1  仪器                                             醇溶解，于 40 ℃水浴下旋转蒸发去除溶剂后加入透析
            FA1004 型电子分析天平（上海越平科学仪器有限                       后的脂质体混悬液，40 ℃水浴下振摇20 min以包载柔红
        公司）；DZKW-S-4 型电热恒温水浴锅（北京市永光明医                       霉素，即得GGPFV修饰的柔红霉素/薯蓣皂苷脂质体。
        疗仪器有限公司）；SG3300H型超声波清洗器（上海冠特                            按上述制备方法，除不加入柔红霉素和薯蓣皂苷
        超声仪器有限公司）；RE52CS 型旋转蒸发器（上海亚荣                        外，其余步骤相同，制备空白脂质体；除不加入 DSPE-
        生化仪器厂）；JY92-2D型超声波细胞破碎机（宁波新芝                        PEG2000-GGPFV 外，其余步骤相同，制备柔红霉素/薯蓣
        生 物 科 技 股 份 有 限 公 司）；20AT 型 高 效 液 相 色 谱             皂苷脂质体。
        （HPLC）仪（日本 Shimadzu 公司）；葡聚糖凝胶（Sepha-                2.2 柔红霉素和薯蓣皂苷的含量测定
        dex）G50 柱（上海华蓝化学科技有限公司）；TS-1000 型                       采用HPLC法     [11-12] 测定样品含量。
        摇床振荡器（江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；                           2.2.1  柔红霉素含量测定的色谱条件              色谱柱：Agilent
        HBS-1096A 型酶标仪（南京德铁实验设备有限公司）；                       C18 （250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：乙腈-0.02 mol/L磷
        YA1072 型透析袋 MD34（8 000～14 000D）（北京索莱宝               酸二氢钠溶液（含0.45％ 三乙胺，以磷酸调pH至4）（32 ∶
        科技有限公司）；85-1型磁力搅拌器（巩义市予华仪器有                         68，V/V）；柱温：30 ℃；检测波长：233 nm；流速：1 mL/
        限责任公司）。                                             min；进样量：20 μL。
        1.2  药品与试剂                                          2.2.2  薯蓣皂苷测定的色谱条件             色谱柱：Agilent C18
            柔红霉素对照品（大连美仑生物技术有限公司，批号：                       （250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：乙腈-水（70 ∶ 30，V/
        28008-55-1，纯度：＞98％）；薯蓣皂苷对照品（成都德锐                    V）；柱温：30 ℃；检测波长：203 nm；流速：1 mL/min；进
        可生物科技有限公司，批号：19057-60-4，纯度：≥98％）；                   样量：20 μL。


        ·2580 ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 21                                 中国药房    2020年第31卷第21期
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