Page 29 - 2020年21期

空白脂质体
柔红霉素/薯蓣皂苷脂质体
100 100
80 80 120 GGPFV修饰的柔红霉素/薯蓣皂苷脂质体
％ 60
Y， 40 ％ 60 100
20
0 Y， 40 ％ 80 ＊ ＊ ＊
1.00 20 1.00 ＊# ＊ ＊ ＊ ＊
2.50
2.00 1.00 0 4.00 细胞存活率， 60 ＊
2.50 ＊#
3.00 4.00 5.50 ＊
7.00 A，mg
B，mL 4.00 7.00 5.50 0.50 8.50 40
8.50 A，mg 0.60 0.70 0.80 0.90 10.00 ＊#
5.00 10.00 C，mg 1.00 20 ＊#
＊#
a.因素A-B交互作用 b.因素A-C交互作用 0
0 0.5 1 2 4 6 8 10
脂质体中柔红霉素浓度，μmol/L
100
80 ＊
％ 60 注：与空白脂质体比较，P＜0.05；与柔红霉素/薯蓣皂苷脂质体比
Y， 40 较，P＜0.05
#
20
＊
0 Note：vs. blank liposome， P＜0.05；vs. Daunorubicin/dioscin lipo-
#
5.00 some，P＜0.05
4.00 图4 不同脂质体制剂对人乳腺癌MDA-MB-435S细胞
3.00
B，mL 0.50
2.00 0.60 存活率的影响
0.80 0.70
1.00 1.00 0.90 C，mg
Fig 4 Effects of different liposomal formulations on
c.因素B-C交互作用
survival rate of human breast cancer MDA-
图3 各因素对包封率影响的响应面图
MB-435S cells
Fig 3 Response surface graph of the effects of each
factor on encapsulation efficiency 单因素方差分析，可得不同脂质体对 MDA-MB-435S 细
胞的抑制作用大小排序：GGPFV 修饰的柔红霉素/薯蓣
封 率 进 行 了 测 定 ，结 果 显 示 柔 红 霉 素 的 包 封 率 为
皂苷脂质体＞柔红霉素/薯蓣皂苷脂质体＞空白脂质体，
（91.38 ± 2.53）％ ，薯 蓣 皂 苷 的 包 封 率 为（92.01 ± 组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结果表明，该
1.86）％，表明GGPFV修饰对两药的包封率无明显影响。 脂质体的膜材对细胞无毒性，且 GGPFV 的修饰增强了
2.5 不同脂质体制剂对人乳腺癌 MDA-MB-435S 细胞 含药脂质体对人乳腺癌 MDA- MB-435S 细胞的抑制
的抑制作用 作用。
[15]
采用SRB法 测定空白脂质体、柔红霉素/薯蓣皂苷 3 讨论
脂质体、GGPFV 修饰的柔红霉素/薯蓣皂苷脂质体的细
柔红霉素作为一种临床常用的抗肿瘤药，因其靶向
胞毒性。将对数生长期的人乳腺癌 MDA-MB-435S 细 [16-17]
性较低，导致对机体会产生毒副作用 ；薯蓣皂苷可通
4
胞铺在 96 孔板上，铺板密度为 1.7×10 个/孔，于 37 ℃、 过多通路、多靶点、多途径诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤
5％ CO2条件下培养，待其长满单层后，分别向孔中加入 细胞增殖及侵袭转移，然而其疏水性限制了其临床应
以上3种脂质体制剂。将脂质体中柔红霉素的浓度梯度 用 。将柔红霉素和薯蓣皂苷同时包载到脂质体中的
[18]
调整为 0.5、1、2、4、6、8、10 μmol/L，以 DMEM 培养基为 制剂策略可显著弥补两药在应用中的不足（柔红霉素被
空白对照，每个浓度设置 4 个复孔，给药后继续培养 48 包载于脂质体的亲水性内核，薯蓣皂苷被包载于疏水性
h。吸弃培养液，将细胞在 4 ℃的 10％三氯乙酸溶液中 的磷脂双分子层之间）。脂质体具有可穿过肿瘤区域微
固定1 h，弃去固定液并用水洗板5次；晾干，以SRB试剂 血管内皮间隙的理想粒径（20～200 nm），可通过高渗透
染色 30 min，1％冰醋酸溶液洗板 5 次以清除多余 SRB； 长滞留（EPR）效应进入肿瘤组织，使药物尽可能多地分
晾干，每孔加入 200 μL Tris 碱溶液，于摇床振荡器振荡 布在肿瘤区域 ；GGPFV 作为一种高效新型穿膜肽，可
[19]
30 min 后，用酶标仪于 540 nm 波长下测定光密度（OD） 携带药物或药物载体通过胞吞作用进入癌细胞 。本
[14]
值，计算细胞存活率[细胞存活率（％）＝药物组OD值/空 研究通过薄膜分散法和硫酸铵水合法制备GGPFV修饰
白对照组OD值×100％]并绘制存活率曲线，详见图4。 的柔红霉素/薯蓣皂苷脂质体，将 GGPFV 修饰在脂质体
由图 4 可知，空白脂质体对人乳腺癌 MDA-MB- 表面，可增加癌细胞对药物的摄入量，增强抗癌效果。
435S 细胞几乎没有细胞毒性，而柔红霉素/薯蓣皂苷脂 同时，通过人乳腺癌 MDA-MB-435S 细胞体外抑制试验
质体和 GGPFV 修饰的柔红霉素/薯蓣皂苷脂质体可使 证实，GGPFV 修饰的柔红霉素/薯蓣皂苷脂质体的细胞
MDA-MB-435S 细胞存活率降低，表现出一定细胞毒 抑制作用强于未加GGPFV修饰的柔红霉素/薯蓣皂苷脂
性。经 Graphpad Prism 7.0 软件计算可得两种含药脂质 质体。
体的半数抑制浓度（IC50 ）分别为（8.87±0.12）、（5.53± 近年来，研究者多以正交设计方法优化药物脂质体
0.09）μmol/L。利用 SPSS 17.0 软件对本实验结果进行 制剂处方及制备工艺，方法虽简单，但是优选结果不会

中国药房 2020年第31卷第21期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 21 ·2583 ·