Page 34 - 2020年21期

于 4 ℃孵育过夜；用三羟甲基氨基甲烷盐酸盐（TBST） 时定位于胞核和胞浆中（图中白色箭头所示为迁移至胞
溶液清洗3次，加入HRP标记的二抗（稀释度为1∶5 000）， 浆的 HMGB1，下同），提示 LPS 可促进 HMGB1 从胞核
室温孵育1 h；用TBST溶液清洗3次，以ECL法显色后， 向胞浆迁移；各给药组中，HMGB1 主要定位于胞核中，
于全自动化学发光图像分析仪上成像。采用 Image J 其迁移较 LPS 组减少，提示 SFI 可抑制 LPS 诱导的

1.8.0软件分析图像，以目标蛋白与内参（总蛋白、浆蛋白 HMGB1核转位。
内参：β-actin；核蛋白内参：H3）条带灰度值的比值作为
目标蛋白的表达量，分别记为细胞中 HMGB1、TLR4蛋
白以及细胞胞核、胞浆中HMGB1蛋白的表达量。 空白对照组
2.3.4 细胞上清液中炎症因子水平检测 采用 ELISA
法检测。取对数生长期细胞，按“2.3.2”项下方法分组、
给药，培养24 h后，收集细胞上清液，以酶标仪检测各细
胞上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α的水平。严格按照相
应试剂盒说明书操作，孵育过程在 37 ℃恒温培养箱中 LPS组
进行。
2.4 统计学方法
上述各项试验均平行操作 3 次。采用 SPSS 23.0 软
件对数据进行统计分析。计量资料均以x±s表示，组间 阳性对照组
比较采用单因素方差分析。P＜0.05 为差异有统计学

意义。
3 结果
3.1 给药剂量筛选结果
与对照组比较，SFI 16 μL/mL组细胞的存活率显著 SFI低剂量组
降低（P＜0.05）；而其余各剂量组细胞存活率与对照组
比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），详见表 2。基于
此，本研究选择12 μL/mL作为SFI高剂量，6、3 μL/mL分
别作为中、低剂量进行后续试验。
表 2 不同剂量 SFI 对 RAW264.7 细胞存活率的影响 SFI中剂量组
（x±±s，n＝3，％％）

Tab 2 Effects of different doses of SFI on the survival
rate of RAW264.7 cells（x±±s，n＝3，％％）
组别 细胞存活率 组别 细胞存活率 SFI高剂量组
对照组 100 SFI 8 μL/mL组 99.158±2.504
SFI 1 μL/mL组 101.624±5.231 SFI 12 μL/mL组 98.778±4.137
SFI 2 μL/mL组 100.569±4.316 SFI 16 μL/mL组 83.655±6.880 ＊
SFI 4 μL/mL组 100.482±3.917 CY3 DAPI Merge
＊
注：与对照组比较，P＜0.05 图 1 SFI 对 LPS 诱导的 RAW264.7 细胞中 HMGB1 核
Note：vs. control group，P＜0.05 转位影响的显微图（免疫荧光法，×630）
＊
3.2 SFI对LPS诱导的RAW264.7细胞中HMGB1核转 Fig 1 Micrographs of the effects of SFI on HMGB1
位的影响 nuclear translocation in LPS-induced RAW264.7
cells（immunofluorescence method，×630）
SFI 对 LPS 诱导的 RAW264.7 细胞中 HMGB1 核转
位影响的显微图见图1（图中，“Cy3”“DAPI”分别标记胞 3.3 SFI 对 LPS 诱 导 的 RAW264.7 细 胞 中 HMGB1

内、胞核HMGB1蛋白，“Merge”为前两者重叠）。由图1 mRNA表达的影响
可见，空白对照组中，Cy3标记的HMGB1主要定位于胞 与空白对照组比较，LPS 组细胞中 HMGB1 mRNA
核，与DAPI标记的胞核重叠；LPS组中，可见HMGB1同 的表达量显著升高（P＜0.01）；与 LPS 组比较，各给药组

·2588 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 21 中国药房 2020年第31卷第21期