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测定 参照邻苯三酚自氧化方法 并作部分调整后，取 100
[14]
乙酸乙酯部位
“2.2.1”项下 4 种极性部位以及 BHT 工作溶液分别进行 ％ 96 石油醚部位
超氧阴离子自由基清除试验。每种极性部位样品及 92 水部位
正丁醇部位
BHT均设置11个具塞比色管，编为0～10号：0号比色管 DPPH自由基清除率， 88 BHT
加入 1 mol/L Tris-HCl 缓冲液（pH 7.4）4 mL、2.5 mmol/L 84
邻苯三酚溶液 0.4 mL 和无水乙醇 1 mL，作为空白管；
80
1～5 号比色管加入 1 mol/L Tris-HCl 缓冲液 4 mL、2.5 0 1 2 3 4 5
样品质量浓度，μg/mL
mmol/L邻苯三酚溶液0.4 mL和相应药物的系列工作液
图 1 草果醇提物不同极性部位对 DPPH 自由基的清
（0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 μg/mL）各 1 mL，作为试验管；6～
除率
10 号比色管加入 1 mol/L Tris-HCl 缓冲液 4 mL、水 0.4
Fig 1 Scavenging rate of different polar parts of etha-
mL 和相应药物的系列工作液（0.5、1.0、2.0、3.0、4.0
nol extract from A. tsao-ko to DPPH radical
μg/mL）各1 mL，作为对照管。各比色管混匀后，在室温
DPPH自由基的清除能力。在相同的质量浓度条件下，4
下反应 5 min，然后滴加8 mmol/L HCl溶液1 mL终止反
种极性部位对超氧阴离子自由基的清除率均强于BHT；
应。以水进行调零，采用紫外-可见分光光度计在320 nm
其中，正丁醇部位对超氧阴离子自由基的清除能力最强，
波长处测定各反应溶液的A值，按公式计算超氧阴离子清
当其质量浓度从3.0 μg/mL升至4.0 μg/mL时，其清除率
除率：超氧阴离子清除率（％）＝[1－（A 试验－A 对照 ）/A 空白]×
大幅增强，从44.76％升至74.65％；其余3种部位和阳性
100％。每种样品均重复测定3次。
对照BHT对超氧阴离子自由基的清除率较为接近，均低
3+
2.2.4 不同极性部位对Fe 的还原能力测定 参照文献
于 40％，详见图 2。总体而言，各样品对超氧阴离子自
方法 ，取“2.2.1”项下4种极性部位以及BHT工作溶液
[15]
由基的清除能力强弱排序为：正丁醇部位＞石油醚部
分别进行 Fe 还原试验。每种极性部位样品及 BHT 均
3+
位＞水部位＞乙酸乙酯部位＞BHT。
设置 15 mL 离心管 5 支，分别加入相应药物的系列工作
80
溶液（0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 μg/mL）各 1 mL、0.2 mol/L 的 ％ 70 乙酸乙酯部位
磷酸盐缓冲液（pH 6.6）2.5 mL 和 1％铁氰化钾溶液 2.5 60 石油醚部位
mL。各离心管在50 ℃水浴中加热反应20 min后，加入 超氧阴离子自由基清除率， 50 水部位
正丁醇部位
10％三氯乙酸溶液2.5 mL终止反应，然后以3 000 r/min 40 BHT
离心 10 min；取上清液 2.5 mL 于具塞比色管中，加入水 30
2.5 mL 和 0.1％FeCl3 溶液 0.5 mL，混匀，静置反应 10 20
min。以水进行调零，采用紫外-可见分光光度计在波长 0 1 2 3 4 5
样品质量浓度，μg/mL
700 nm 处测定各反应溶液的 A 值。以 A 值表示待测药 图2 草果醇提物不同极性部位对超氧阴离子自由基的
物对Fe 的还原能力，A值越大，则表示药物的还原能力 清除率
3+
[15]
越强 。每种样品均重复测定3次。 Fig 2 Scavenging rate of different polar parts of etha-
3 结果 nol extract from A. tsao-ko to superoxide anion
3.1 草果醇提物不同极性部位对 DPPH 自由基的清除 radical
能力 3.3 草果醇提物不同极性部位对Fe 的还原能力
3+
草果醇提物4种极性部位对DPPH自由基的清除率 随着草果醇提物不同极性部位质量浓度的增加，其
均达 80％以上，表明清除能力均较强。其中，当样品质 对 Fe 的还原能力也在不断增强。当样品质量浓度在
3+
量浓度为 4 μg/mL 时，乙酸乙酯部位对 DPPH 自由基清 0.5～3.0 μg/mL范围内时，正丁醇部位对Fe 的还原能力
3+
除的能力最强，清除率为99.82％，接近100％；其次为阳 强于其他部位；但当样品质量浓度达到4.0 μg/mL时，水
性对照 BHT，清除率为 95.26％；正丁醇部位、石油醚部 部位对Fe 的还原能力大幅增强，并稍强于正丁醇，详见
3+
3+
位、水部位的清除率分别为 91.79％、87.96％、83.76％， 图3。总体而言，各样品质量浓度较低时，对Fe 的还原
详见图 1。总体而言，各样品对 DPPH 自由基的清除能 能力强弱排序为：正丁醇部位＞BHT＞乙酸乙酯部位＞
力强弱排序为：乙酸乙酯部位＞BHT＞正丁醇部位＞石 石油醚部位＞水部位；但样品质量浓度升高至一定程度
3+
油醚部位＞水部位。 时，水部位对Fe 的还原能力最强。
3.2 草果醇提物不同极性部位对超氧阴离子自由基的 4 讨论
清除能力 抗氧化是指抗氧化自由基的简称，人体与外界持续
草果醇提物的4种极性部位对超氧阴离子自由基的 接触时，由于呼吸（氧化反应）、外界污染、放射线照射等
[16]
清除率大部分为 30％～40％，清除能力明显弱于其对 因素，会不断地产生自由基 。紫外线辐射、环境污染、

中国药房 2020年第31卷第8期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 8 ·955 ·