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2.7 HUVEC侵袭能力检测
采用 Transwell 侵袭试验检测。取对数生长期的
HUVEC 适量，经含 EDTA 的胰蛋白酶消化、计数后，以
1×10 个/mL按每孔2 mL接种至6孔板中，将其随机分为
5
空白组和TAG低、中、高剂量组（40、80、120 μg/mL），每组
设 3 个复孔。弃去培养基，空白组于小室上层加入 RP-
A.空白组 B. TAG低剂量组
MI 1640 完全培养基 200 μL，各给药组于小室上层加入
含相应药物的RPMI 1640完全培养基200 μL，各组均于
小室下层加入 RPMI 1640 完全培养基 700 μL。培养 24
h，弃去上清液，用棉签擦拭上层底部未穿膜的细胞，用
、
PBS 清洗，以多聚甲醛溶液固定 20 min 后，加结晶紫试
剂染色15 min，用PBS清洗，使用倒置荧光显微镜观察，
C. TAG中剂量组 D. TAG高剂量组
每孔随机选择5个视野，拍照并记录染色细胞（染色后呈 图1 TAG对HT-29细胞形态影响的显微图（×200）
紫红色的细胞即为发生迁移的细胞）数，同时计算侵袭 Fig 1 Micrographs of the effects of TAG on morpholo-
率：侵袭率＝试验组迁移细胞数/空白组迁移细胞数× gy of HT-29 cells（×200）
100％。上述试验重复3次。
2.8 HUVEC管腔形成情况检测
采用管腔形成试验检测。用 4 ℃预冷的移液枪吸
取Matrigel基质胶置于24孔板中，平铺，于37 ℃平衡40
min。取对数生长期的HUVEC适量，经含EDTA的胰蛋
5
白酶消化、计数后，以1×10 个/mL按2 mL/孔接种至6孔
A.空白组 B. TAG低剂量组
板中，将细胞随机分为空白组和 TAG 低、中、高剂量组
（40、80、120 μg/mL），空白组加入 RPMI 1640 完全培养
基2 mL，各给药组加入含相应药物的RMPI 1640完全培
养基2 mL，培养24 h后，以含EDTA化的胰蛋白酶消、计
数，用RMPI 1640完全培养基调整各组细胞浓度至5.0× 、
10 个/mL。吸取上述单细胞悬液以1.0×10 个/孔接种至
5
5
C. TAG中剂量组 D. TAG高剂量组
铺好基质胶的 24 孔板中，每组设 3 个复孔，分别于培养
图2 TAG对HUVEC形态影响的显微图（×200）
的4、12、24 h时使用倒置荧光显微镜观察管腔形成的情
Fig 2 Micrographs of the effects of TAG on morpholo-
况，随机选择 5 个视野，使用 Image Pro-Plus 6.0 分析，取
gy of HUVEC（×200）
平均值作为检测结果。上述试验重复3次。
2.9 统计学方法 3.2 TAG对细胞活力的影响
使用SPSS 23.0软件对数据进行统计分析。计量资 与空白组比较，TAG各剂量组细胞存活率均显著降
料 以 x ± s 表 示 ，组 间 比 较 采 用 单 因 素 方 差 分 析 低（P＜0.05或P＜0.01）；而DMSO组细胞存活率与空白
组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），详见表1。
（One-way ANOVA），多重比较采用 LSD 检验。P＜0.05
表 1 TAG 对 HT-29、HUVEC 存活率的影响（x±±s，n＝
为差异有统计学意义。
3，％％）
3 结果
Tab 1 Effects of TAG on the survival rate of HT-29
3.1 TAG对细胞形态的影响
cells and HUVEC（x±±s，n＝3，％％）
空白组 HT-29 细胞成片生长，细胞间连接紧密；随
组别 HT-29细胞 HUVEC
着 TAG 剂量的增加，细胞数量有逐渐变少的趋势，且细
空白组 100.00±1.80 100.00±1.24
胞间连接松散，成群细胞变小，形态未见明显变化，但可 DMSO组 100.06±1.80 98.97±0.60
见呈明亮小颗粒状的死亡细胞，详见图1。 TAG低剂量组 83.30±1.54 ＊ 86.06±1.86 ＊
TAG中剂量组 53.25±1.47 ＊＊ 56.13±1.81 ＊＊
空白组HUVEC呈单层成簇生长，大多为梭形，小部
TAG高剂量组 31.43±0.80 ＊＊ 24.08±1.45 ＊＊
分为椭圆形，并具有旋涡状排列的特征，细胞边缘光滑、
注：与空白组比较，P＜0.05， P＜0.01
＊＊
＊
清晰，形态饱满；经 TAG 干预后，细胞生长发生紊乱，胞 Note：vs. blank group， P＜0.05， P＜0.01
＊＊
＊
质皱缩，边缘模糊，且TAG高剂量组细胞皱缩明显，并可 3.3 TAG对HT-29细胞周期的影响
观察到呈明亮小点状的死亡细胞，详见图2。 与空白组比较，TAG 各剂量组 G2/M 期细胞比例以
中国药房 2020年第31卷第8期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 8 ·959 ·