Page 60 - 202008

d6 ）δ ：1.28～1.32（s，6H，8-CH3，9-CH3 ），1.98（s，3H，
11-CH3 ），2.24～2.32（dd，1H，J＝18.0，7.0 Hz，H-6ax），
丙酮、浓硫酸 苄胺、TBTU、DIPEA
室温搅拌 二氯甲烷/N、N-二甲基甲酰胺，室温搅拌 2.59～2.66（dd，1H，J＝18.0，7.8 Hz，H-6eq），3.71（s，3H，
2-CH3 ），4.23～4.27（m，1H，H-5），4.80（m，1H，H-4），
SA 中间体b 中间体c7
4.87～4.91（m，1H，H-3），6.80（d，1H，J＝6.0 Hz，H-2）；
13 C-NMR（100 MHz，CDCl3 ）δ：130.1（C-1），133.8（C-2），
LiAlH4、四氢呋喃 冰醋酸
加热回流 加热回流 73.9（C-3），76.0（C-4），69.9（C-5），28.3（C-6），121.1
（C-7），26.6（C-8，9），170.2（C-10），21.0（C-11），167.2
中间体e T14
图5 目标化合物T14的合成路线 （C-1′），52.3（C-2′）。根据上述波谱数据确定 T15为（3R，
4S，5R）-3，4-O-异亚丙基-5-O-乙酰基-1-环己烯-1-甲酸
Fig 5 The synthetic route to the target compound T14
甲酯。所得目标化合物中，T4～T15均未见文献报道，为
目 标 化 合 物 T14—— 白 色 固 体 ，mp：72～73 ℃ ，
首次通过上述合成方法获得的化合物。
ESI-MS：m/z 250.13[M+H] 。 H-NMR（400 MHz，DMSO-
+
1
2.2 SA衍生物耐药逆转活性的检测
d6 ）δ：2.01～2.07（dd，1H，J＝18.0，7.0 Hz，H-6ax），2.35～
本课题组前期采用MTT法检测了化合物T1～T15对
2.37（s，2H，1′-CH2 ），2.60～2.66（dd，1H，J＝18.0，7.0 Hz，
MCF-7 和 MCF-7/PTX 细胞的抑制作用。结果发现，化
H-6eq），3.67～3.69（m，2H，H-4，5），3.74～3.76（m，1H，
合物 T1～T6、T8～T13均无明显的抑制作用，故选择化合
H-3），4.20～4.32（s，2H，2′-CH2 ），4.64～4.65（d，1H，J＝
物T7、T14、T15进行后续研究。
7.0 Hz，5-OH），5.42～5.46（d，1H，J＝7.0 Hz，4-OH），
分别取对数生长期的 MCF-7、MCF-7/PTX 细胞，经
5.56～5.59（d，1H，J＝7.0 Hz，3-OH），6.61（d，1H，J＝6.0
胰蛋白酶消化后计数，用完全培养基（即含 5％FBS 的
Hz，H-2），7.21（d，1H，J＝7.8 Hz，H-6′），7.21～7.32（m，
5
RPMI 1640培养基，下同）调整细胞密度至1×10 个/mL，
13
4H，H-4′，5′，7′，8′）；C-NMR（100 MHz，CDCl3 ）δ：139.0
按每孔 100 μL 接种于 96 孔板中，将其随机分为 PTX 组
（C-1），121.9（C-2），67.7（C-3），68.6（C-4），67.3（C-5），
以及T7、T14、T15不同剂量组，并设置不含细胞的空白对照
32.2（C-6），53.1（C-1′），54.8（C-2′），140.2（C-3′），127.9
组，每组设6个复孔。于37 ℃、5％CO2条件下（下同）培
（C-4′，8′），128.5（C-5′，7′），127.0（C-6′）。根据上述波谱
养24 h，待细胞贴壁后，吸弃培养基，空白对照组加入完
数据确定T14为（3R，4S，5R）-N-（3，4，5-三羟基-1-环己烯
全培养基 180 μL，各给药组加入含相应药物的完全培
甲基）-苄胺。
养基 180 μL（其中，PTX 的剂量为 30 μmol/L，T7的剂量
2.1.5 将目标化合物T1分散于丙酮后，
分别为3、6、12、24、48、96、192、384 μmol/L，T14的剂量分
目标化合物T15
逐滴加入浓硫酸溶液并于室温下搅拌过夜后，用碳酸氢
别为37、74、148、296、592、1 184、2 368、4 376 μmol/L，T15
钠溶液将 pH 调至 7，得（3R，4S，5R）-3，4-O-异亚丙基-5-
的 剂 量 分 别 为 23.5、46.9、93.8、187.5、375.0、750.0、
羟基-1-环己烯-1-甲酸甲酯（中间体j）；将中间体j与适量 1 500.0、3 000.0 μ mol/L，各 药 物 剂 量 设 置 参 考 文
醋酐、吡啶混合，于室温下搅拌，用乙酸乙酯稀释，取有
献[6]）。培养72 h后，吸弃培养基，加入RPMI 1640培养
机层依次用 10％盐酸溶液、水萃取后，再以无水硫酸钠
基180 μL和5 mg/mL的MTT试剂20 μL，孵育4 h后，弃
干燥，得目标化合物 T15，详见图 6。其理化性质及波谱
去上清液，加入二甲基亚砜150 μL，振摇15 min后，使用
数据如下。 酶标仪于490 nm波长处检测吸光度（A）值，并计算细胞
生长抑制率[生长抑制率（％）＝（1－药物组A值/空白对
甲醇、对甲苯磺酸 丙酮、浓硫酸溶液 照组A值）×100％]和5％抑制浓度（IC5 ）。上述试验重复
加热回流 室温搅拌
3次。3种SA衍生物对MCF-7、MCF-7/PTX细胞生长的
抑制作用见图7。
SA T1 中间体J
结合图 7，本研究设定 T7的逆转剂量分别为 30、60、
120 μmol/L，T14的逆转剂量分别为 15、30、60 μmol/L，T15
醋酐、吡啶 的逆转剂量分别为 3、6、12 μmol/L。参照上述 MTT 法，
室温搅拌
以维拉帕米（10 μmol/L，剂量设置参考文献[16]）为阳性
对照、以PTX单用为阴性对照，检测各化合物/阳性对照
T15
与PTX联用对MCF-7/PTX细胞的半数抑制浓度（IC50 ），
图6 目标化合物T15的合成路线
并 计 算 逆 转 倍 数（RI，RI＝ 阴 性 对 照 组 IC50/联 用 组
Fig 6
IC50 ）。以 RI 作为评价指标，其值越大，表明相应化合物
The synthetic route to the target compound T15
目 标 化 合 物 T15—— 白 色 晶 体 ，mp：59～60 ℃ ， 对耐药细胞的逆转活性越强 。上述试验重复3次。
[3]
+
ESI-MS：m/z 229.09[M+H] 。 H-NMR（300 MHz，DMSO- 采用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析。数据以
1
·950 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 8 中国药房 2020年第31卷第8期