Page 18 - 2019年10月第30卷第19期

显示，吸光度的RSD＜1％（n＝6），表明供试品溶液在室 2.3.2 RES 系列质控标准溶液的制备 精密量取 RES
温条件下放置12 h的稳定性良好。 贮备液适量，用甲醇将其稀释成低、中、高质量浓度（0.2、
2.2 体外释放度的测定 1.0、20 μg/mL，下同）的 RES 质控标准溶液，于 4 ℃冰箱
参照 2015 年版《中国药典》（四部）第二法（桨法）测 保存，备用。
定体外释放度 。将相当于RES 300 mg的RES原料药、 2.3.3 内标溶液的制备 精密称取卡马西平对照品适
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RES/HP-β-CD、RES/HP-β-CD/Chitosan 分别置于（37± 量，用甲醇溶解定容，制成质量浓度为1.0 mg/mL的内标
0.5）℃、体积为 900 mL 的水中，转速为 100 r/min，分别 贮备液。精密量取内标贮备液适量，用甲醇稀释成质量
在预定的时间点（RES 原料药和 RES/HP-β-CD 为 0、5、 浓度为25 μg/mL的内标溶液。
10、15、30、60、90、120 min，RES/HP-β-CD/Chitosan 为 0、 2.3.4 色谱条件 色谱柱：Agilent Extend C18 （150 mm×
1、2、3、4、6、8、12 h）取样 5 mL（同时补充 5 mL 水），经 4.6 mm，5 μm）；预柱：Phenomenex C18 （4.0 mm×2.0 mm，
0.45 μm微孔滤膜滤过，用水适当稀释后，在307 nm波长 5 μm）；流动相：乙腈-水（30 ∶ 70，V/V）；流速：1.0 mL/min；
处测定RES吸光度，计算累积释放度（Q），绘制体外释放 进样量：30 μL；检测波长：307 nm；柱温：30 ℃。
曲 线 。 RES 原 料 药 、RES/HP-β-CD 和 RES/HP-β-CD- 2.3.5 血浆样品的处理 取 100 μL 血浆，置于 1.5 mL
Chitosan的体外释放曲线见图2。 EP 管中，依次加入甲醇 10 μL、内标溶液 10 μL、0.5％醋

100 酸 50 μL，涡旋 1 min，再加入乙腈 200 μL 沉淀蛋白，
80 12 000 r/min离心10 min，取上清液30 μL进样分析。
60 RES原料药 2.3.6 专属性考察 取大鼠空白血浆100 μL，按“2.3.5”
％
Q， 40 RES/HP-β-CD 项下方法操作，将其中加入10 μL内标溶液改为加入10
20 μL甲醇，然后进样测定；将加入RES对照品溶液的空白
0 血浆，按“2.3.5”项下方法处理后进样测定；取“2.4”项下
0 20 40 60 80 100 120
t，min 给药后 5 min 大鼠血浆样品，按“2.3.5”项下方法处理后
A. RES原料药和RES/HP-β-CD 进样测定。结果显示，在该色谱条件下，RES 与内标的
80
保留时间分别为4.911、10.291 min，两者分离度良好，且
60 血浆内源性物质不干扰RES的测定，色谱图见图3。
RES/HP-β-CD/Chitosan 2.3.7 标准曲线与定量下限考察 取大鼠空白血浆 8
％ 40
Q， 份，按“2.3.5”项下方法操作，将其中加入10 μL甲醇改为
20
加入 10 μL RES 系列对照品溶液，制成质量浓度分别为
0 10、20、50、100、200、500、1 000、2 500 ng/mL的标准血浆
0 2 4 6 8 10 12
t，h 样品，进样测定。以RES质量浓度为横坐标（x），RES与
B. RES/HP-β-CD/Chitosan 内标的峰面积比值为纵坐标（y），采用加权最小二乘法
图 2 RES 原 料 药 、RES/HP-β-CD 和 RES/HP-β-CD/ 进行回归，得回归方程为y＝0.004 6x+0.092（r＝0.999 2），
Chitosan的体外释放曲线 RES 质量浓度在 10～2 500 ng/mL 范围内与峰面积的线
Fig 2 Release curves in vitro of RES raw materials， 性关系良好，定量下限为10 ng/mL。
RES/HP-β-CD and RES/HP-β-CD/Chitosan
2.3.8 精密度和准确度试验 取低、中、高质量浓度的
由图 2 显示，与 RES 原料药比较，RES/HP-β-CD 的 质控标准溶液，按“2.3.5”项下方法处理后进样测定，记
体外释放度明显增加，5 min 时释放度达到最大，且在 录峰面积，每个浓度测定 6 次，连续测定 3 d，考察日内、
120 min 内保持稳定，120 min 的累积释放度为 87％；与 日间精密度与准确度。结果显示，日内精密度分别为
RES/HP-β-CD 比较，RES/HP-β-CD/Chitosan 的体外释放 2.88％、2.15％、1.68％（n＝6）；日间 RSD 分别为 2.72％、
明显减缓，释放时间明显延长，12 h 的累积释放度为 2.04％、1.98％（n＝3），准确度分别为（100.00±2.88）％、
72％。 （100.80±2.17）％、（98.60±1.65）％（n＝6），均符合要求。
2.3 生物样品中RES的含量测定 2.3.9 提取回收率 取低、中、高质量浓度的质控标准
2.3.1 RES 系列对照品溶液的制备 精密称取 RES 对 溶液，按“2.3.5”项下方法处理后进样测定，每个浓度测
照品适量，用甲醇溶解定容，制备成质量浓度为 1.0 定 6 次，记录峰面积为 A1；另取大鼠空白血浆 100 μL，加
mg/mL的RES贮备液。精密量取RES贮备液适量，用甲 入甲醇 10 μL，乙腈 200 μL，涡旋 5 min，经 12 000 r/min
醇制成质量浓度分别为0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、25 μg/mL 离心 10 min，取上清液，再加入相应质量浓度的 RES 对
的系列对照品溶液，于4 ℃冰箱保存，备用。 照品溶液和内标溶液，进样分析，每个浓度测定3次，记

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