Page 41 - 《中国药房》2026年9期

4 讨论
本研究在既往研究 [11―12] 基础上，通过条件优化建立
10×
了 Eh-ENVs 的分离纯化体系，并采用组织破碎、差速离
100 m 100 m 100 m
μ
μ
μ
心除杂、逐级过滤联合超速离心等方法，成功获得了形
态典型、分散性与稳定性良好的高纯度植物源性外泌体
纳米囊泡——Eh-ENVs，为后续体内外功能研究奠定了
20×
可靠的材料基础。
100 m 100 m 100 m [15]
μ
μ
μ
安全性是外泌体囊泡应用的核心前提 。本研究
NC组 APAP组 Eh-ENVs组 结果显示，Eh-ENVs在体外对AML12细胞和RAW264.7
图4 各组小鼠肝组织病理形态学观察显微图 细胞均无明显毒性；在体内对小鼠主要脏器无明显损
表5 各组小鼠肝组织中炎症因子 mRNA 表达水平比 伤，对肝肾功能指标均无明显影响。上述结果提示，Eh-
较（x±s，n＝4） ENVs 在体内外的安全性良好，具备开展后续药效研究
组别 TNF-α IL-1β IL-10 的条件。同时，细胞摄取结果表明，RAW264.7 细胞对
NC组 1.00±0.63 1.00±0.34 1.00±0.64 Eh-ENVs的摄取呈时间依赖性增强趋势，表明Eh-ENVs
APAP组 2.37±0.54 a 7.55±1.57 a 0.14±0.07 a 可被细胞持续内化，这为其在细胞水平持续发挥生物学
Eh-ENVs组 0.92±0.77 b 2.14±1.33 b 3.12±2.12 b
效应提供了重要的细胞学依据。基于上述良好的安全
a：与NC组比较，P＜0.05；b：与APAP组比较，P＜0.05。
性与细胞摄取特性，本研究在 APAP 诱导的肝损伤小鼠
APAP 组比较，Eh-ENVs 组小鼠肝组织中 SOD 水平显著
模型中进一步验证其药效。结果显示，Eh-ENVs可显著
升高（P＜0.05），MDA 水平显著降低（P＜0.05）。结果
降低血清中 ALT、AST 水平，并减轻肝组织病理损伤与
见表6。
炎症细胞浸润，提示Eh-ENVs具有显著的保肝作用。
表6 各组小鼠肝组织中 SOD、MDA 水平比较（x±s，
n＝6，U/mg prot） 大量研究证实，巨噬细胞活化及促炎/抗炎因子失衡
在DILI的炎症放大过程中扮演核心角色，因此抑制过度
组别 SOD MDA [16]
NC组 40.63±3.97 1.29±0.40 炎症、重塑炎症微环境是减轻 DILI 的重要策略 。IL-
APAP组 30.64±2.54 a 3.18±0.75 a 1β、TNF-α 作为经典的促炎因子，可介导肝内炎症级联
Eh-ENVs组 36.62±3.94 b 1.33±0.32 b
反应；IL-10作为重要的抗炎因子，能够抑制过度炎症反
a：与NC组比较，P＜0.05；b：与APAP组比较，P＜0.05。 [17]
应并参与损伤修复；三者共同调控炎症微环境稳态 。
3.3.6 Eh-ENVs 对 APAP 诱导肝损伤小鼠肝组织中 值得注意的是，尽管 APAP 与 LPS 诱导炎症损伤的初始
Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA及其蛋白表达的影响 启动机制不同，但二者介导的病理过程均依赖巨噬细胞
与 NC 组比较，APAP 组小鼠肝组织中 Nrf2、HO-1、 的活化及共同炎症信号通路 。因此，LPS 诱导的巨噬
[18]
NQO1 mRNA 及其蛋白表达均显著下调（P＜0.05）；与 细胞炎症模型可有效模拟APAP诱导肝损伤过程中的炎
APAP 组比较，Eh-ENVs 组小鼠肝组织中 Nrf2、HO-1、 症效应阶段。基于此，本研究进一步引入 LPS 诱导的
NQO1 mRNA 及其蛋白表达均显著上调（P＜0.05）。结 RAW264.7 巨噬细胞炎症模型，设计体外实验验证 Eh-
果见图5、表7。 ENVs的抗炎作用。本研究结果显示，在体内外实验中，
Eh-ENVs 可下调细胞/肝组织中 IL-1β、TNF-α mRNA 表
Nrf2 110 kDa
达，上调细胞/肝组织中 IL-10 mRNA 表达，提示 Eh-
HO-1 32 kDa
ENVs可有效抑制炎症反应，促进细胞/肝组织从炎症状
NQO1 28 kDa
态向修复状态转化。
[6]
β-actin 42 kDa 氧化应激是APAP诱导的肝损伤的核心驱动因素 。
NC组 APAP组 Eh-ENVs组
其不仅作为DILI的启动因子，更与炎症反应形成相互加
图5 各组小鼠肝组织中 Nrf2、HO-1、NQO1 蛋白表达 剧的恶性循环 。SOD 水平反映内源性抗氧化储备能
[19]
的电泳图 力，MDA水平代表脂质过氧化损伤程度，二者是评价体
表7 各组小鼠肝组织中 Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA 及 内氧化应激水平的经典指标 ；ROS水平则直接反映巨
[20]
[21]
其蛋白表达水平比较（x±s，n＝4） 噬细胞的氧化应激负荷 。本研究结果显示，Eh-ENVs
Nrf2 HO-1 NQO1 在体内可显著升高 SOD 表达，降低 MDA 表达，在体外
组别
mRNA 蛋白 mRNA 蛋白 mRNA 蛋白 可有效清除细胞内 ROS。这提示 Eh-ENVs 可通过抑制
NC组 1.00±0.61 1.00±0.14 1.00±0.65 1.00±0.58 1.00±0.34 1.00±0.14 氧化应激，从而发挥保肝作用。
APAP组 0.18±0.03 a 0.61±0.15 a 0.32±0.18 a 0.48±0.15 a 0.11±0.02 a 0.50±0.10 a
Eh-ENVs组 0.95±0.20 b 0.86±0.10 b 2.95±2.34 b 4.37±1.34 b 1.18±0.07 b 0.74±0.09 b 为进一步阐明 Eh-ENVs 改善 APAP 诱导肝损伤的
a：与NC组比较，P＜0.05；b：与APAP组比较，P＜0.05。 分子机制，本研究聚焦 Nrf2/HO-1/NQO1 通路进行了探

中国药房 2026年第37卷第9期 China Pharmacy 2026 Vol. 37 No. 9 · 1139 ·