Page 43 - 《中国药房》2026年7期

expression of gasdermin D-N （GSDMD-N） were observed by immunofluorescence. Interleukin-1β （IL-1β） and IL-18 contents in
supernatants were detected by ELISA； mRNA and protein expressions of NLRP3， Caspase-1， and GSDMD were measured using
real-time PCR and Western blot. RESULTS Compared with the Control group， the Model group showed typical pyroptotic
morphology （cell membrane bulging and pore formation）， increased aggregation and fluorescence intensity of GSDMD-N on the
cell membrane （P＜0.05）， significantly increased the contents of IL-1β and IL-18 in cell supernatants （P＜0.05）， and significantly
up-regulated mRNA and protein expressions of NLRP3， Caspase-1， and GSDMD in cells （P＜0.05）. Compared with the Model
group， the HQHF-L， HQHF-M and HQHF-H groups showed improved pyroptotic morphology， reduced membrane localization and
significantly weakened fluorescence intensity of GSDMD-N （P＜0.05）， significantly decreased the contents of IL-1β and IL-18 in
cell supernatants （P＜0.05）， and significantly down-regulated mRNA and protein expressions of NLRP3， Caspase-1， and GSDMD
in cells （P＜0.05）. CONCLUSIONS HQHF inhibits LPS-induced macrophage pyroptosis， and its mechanism of improving MASH
may be associated with the suppression of the activation of the classical NLRP3/Caspase-1/GSDMD pyroptosis pathway.
KEYWORDS Huatan qushi huoxue formula； metabolic dysfunction-associated steatohepatitis； macrophage； pyroptosis； NOD-
like receptor protein 3； Caspase-1； gasdermin D

代 谢 相 关 脂 肪 性 肝 病（metabolic dysfunction- 1/GSDMD 这一经典焦亡通路的干预作用，旨在为揭示
associated fatty liver disease，MAFLD）是全球范围内最 中医“痰湿瘀”理论的生物学内涵以及 MASH 的中医药
常见的慢性肝病之一，其炎症进展阶段——代谢相关脂 治疗提供实验依据。
肪性肝炎（metabolic dysfunction-associated steatohepati‐ 1 材料
tis，MASH）以肝脂肪变性、炎症反应和肝纤维化为主要 1.1 主要仪器
[1]
特 征 。 巨 噬 细 胞 ，尤 其 是 肝 脏 中 的 库 普 弗 细 胞 本研究所用主要仪器包括Infinite M Nano型全波长
（Kupffer cells，KCs），在 MASH 炎症的启动与级联放大 酶标仪（瑞士Tecan公司），IX73型倒置相差荧光显微镜
[2]
中发挥核心调控作用 。 （日本 Olympus 公司），SU8100 型扫描电子显微镜（日本
细胞焦亡作为一种炎症小体介导的程序性细胞死 Hitachi 公司），3111 型 CO2 细胞培养箱（美国 Thermo
亡方式，近年来被证实是 MASH 发病机制的关键环节。 Fisher Scientific 公司），DYCZ-24DN 型双垂直电泳仪、
®
其经典通路以 NOD 样受体蛋白 3（NOD-like receptor DYCZ-40D型转印电泳仪（北京六一仪器厂），GeneAmp
protein 3，NLRP3）炎症小体激活为起始，进而活化胱天 9700 型实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time PCR）
蛋白酶1（Caspase-1）；活化的Caspase-1可切割消皮素D 仪（美国ABI公司）。
（gasdermin D，GSDMD），生成具有膜穿孔活性的消皮素 1.2 主要药品与试剂
D-N端（gasdermin D-N，GSDMD-N）片段，最终引发细胞 化 痰 祛 湿 活 血 方 颗 粒 剂（规 格 12 g/袋 ，批 号
膜破裂及白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-18等 22053020）购自江苏省江阴天江药业有限公司；LPS（批
炎症因子释放，加剧局部及全身炎症反应 [3―4] 。有研究 号S11060）购自上海源叶生物科技有限公司；DMEM培
证实，在 MASH 进程中，肠道菌群紊乱导致的内毒素易 养基（批号 6125558）购自美国 Gibco 公司；IL-18 酶联免
位可能激活 KCs 中 NLRP3/Caspase-1/GSDMD 通路，进 疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号 FN250901C）购自武
而驱动肝星状细胞活化及纤维化形成 [5―7] 。因此，靶向 汉菲恩生物科技有限公司；总 RNA 提取试剂（批号
该通路可能成为干预MASH炎症进程的有效策略。 2500090005）购 自 北 京 索 莱 宝 科 技 有 限 公 司 ；兔 源
目前，MASH 的临床治疗缺乏特异性药物，常用的 NLRP3 抗体（批号 ab263899）购自英国 Abcam 公司；兔
他汀类药物也因潜在肝毒性导致应用受限，而中医药在 源 GSDMD 抗体（批号 AF4012）购自美国 Affinity 公司；
[8]
免疫调控与炎症抑制方面具有独特优势 。化痰祛湿活 兔源 GSDMD-N 抗体（批号 GB154198-100）购自武汉赛
血方是第二届全国名中医赵文霞教授制定的用于治疗 维尔生物科技有限公司；Western blot快速封闭液、IL-1β
MASH 的经验方。本课题组前期研究已证实其可改善 ELISA 试剂盒以及兔源 Caspase-1、鼠源甘油醛-3-磷酸
脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的巨噬细胞焦亡形 脱氢酶（GAPDH）抗体、辣根过氧化物酶标记的山羊抗
态，并下调焦亡执行蛋白GSDMD-N的表达 ，提示该方 兔 IgG 二抗、辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠 IgG 二抗
[9]
在调控细胞焦亡方面具有明确潜力。然而，上述研究主 （批 号 分 别 为 20036548、40002794、22915-1-Ap-100、
要集中在细胞焦亡的终末形态及执行蛋白上，对方剂干 00173787、20001626、20001659）均购自武汉三鹰生物技
预的上游信号通路调控机制尚未阐明。因此，本研究基 术有限公司。
于前期研究基础，通过用 LPS 诱导建立 RAW264.7 巨噬 1.3 动物
细胞焦亡模型，从形态学、炎症因子释放及分子表达等 SPF 级 SD 大鼠 30 只，雄性，体重（150±20） g，购自
多个层面系统探究化痰祛湿活血方对 NLRP3/Caspase- 浙江维通利华实验动物技术有限公司桐乡分公司，动物

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