Page 45 - 《中国药房》2026年7期
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方法分组、造模与给药。培养24 h后，弃去上清液，收集                        孔；部分细胞膜破裂，细胞质外溢，且细胞空洞数量较
          细胞，采用 RIPA 裂解液提取各组细胞中总蛋白。采用                        多。与 Model 组比较，HQHF-L、HQHF-M、HQHF-H 组
          BCA法对蛋白定量后，调整浓度并加入上样缓冲液进行                          细胞的细胞膜完整性均有不同程度改善。结果见图1。
          沸水浴变性。取 8 μg 变性蛋白上样进行十二烷基硫酸                        3.2.2 相差荧光显微镜观察结果
          钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（先以电压80 V电泳30 min，再                         Control组细胞呈圆形，形态规则。Model组细胞形
          以电压 120 V 电泳 90 min）；采用湿转法（300 mA 恒流、              态不规则，多呈长触角状。与Model组比较，HQHF-H组
          冰浴2 h）将蛋白转移至0.45 μm PVDF膜，以5%脱脂奶                   细胞形态改善最明显，偶见长触角；HQHF-L、HQHF-M
          粉室温封闭 1.5 h；加入 NLRP3、Caspase-1、GSDMD（稀             组细胞形态亦有不同程度改善。结果见图2。
          释比例均为 1∶2 000）一抗和 GAPDH 一抗（稀释比例为                   3.3 细胞中GSDMD-N蛋白的定位与表达检测结果
          1∶20 000），4 ℃孵育过夜；次日用 TBST 洗膜后，加入荧                     Control 组 细 胞 中 GSDMD-N 蛋 白 的 荧 光 强 度
          光二抗（稀释比例为1∶10 000），室温避光孵育1 h。加入                   （10.19±3.02）微弱。与Control组比较，Model组细胞中
          ECL 底物显影成像后，采用 Image J 软件分析条带灰度                    GSDMD-N 蛋白主要聚集于细胞膜，荧光强度（92.91±
          值，以目的蛋白与内参蛋白（GAPDH）条带灰度值的比                         0.28）显著增强（P＜0.05）；HQHF-H、HQHF-M、HQHF-L
          值表示目的蛋白的表达水平。实验重复3次。                               组细胞中 GSDMD-N 蛋白的膜定位减少，荧光强度（分
          2.9 统计学方法                                          别为31.54±2.65、35.60±2.75、56.38±6.21）均显著减弱
              采用 GraphPad Prism 10.0 软件进行数据分析和作             （P＜0.05）。结果见图3。
          图。计量资料符合正态分布，以x±s表示。多组间比较                          3.4 细胞培养上清液中IL-1β、IL-18含量测定结果
          采用单因素方差分析，组间两两比较采用Tukey检验。检                            与 Control 组比较，Model 组细胞培养上清液中 IL-
          验水准α＝0.05。                                         1β、IL-18 含量均显著升高（P＜0.05）；与 Model 组比较，
          3 结果                                               HQHF-L、HQHF-M、HQHF-H 组细胞培养上清液中 IL-
          3.1 不同浓度含药血清对细胞增殖的影响                               18、IL-1β含量均显著降低（P＜0.05）。结果见图4。
              对照组和 2.5%、5%、10%、15% 含药血清组细胞存                  3.5 细胞中 NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA 及其
          活 率 分 别 为（103.23±1.26）% 、（102.36±1.82）% 、          蛋白表达测定结果
         （98.77±2.15）%、（92.42±1.75）%、（82.29±2.03）%。与             与Control组比较，Model组细胞中NLRP3、Caspase-
          对照组比较，2.5%、5%含药血清组细胞存活率差异均无                        1、GSDMD mRNA 及其蛋白表达水平均显著升高（P＜
          统计学意义（P＞0.05），提示 2.5%、5% 含药血清安全性                   0.05）；与Model组比较，HQHF-L、HQHF-M、HQHF-H组
          良好，不会损伤细胞活力；10% 含药血清组细胞存活率                         细胞中 NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA 及其蛋白表
          虽显著降低（P<0.05），但降低幅度处于可接受范围。因                       达水平均显著降低（P＜0.05）。结果见表2、图5。
          此，本研究后续选取 2.5%、5%、10% 含药血清用于探讨                     4 讨论
          化痰祛温活血方对巨噬细胞炎症及焦亡的调控作用。                                MAFLD 疾病谱从单纯性脂肪肝可进展为 MASH、
          3.2 细胞形态学观察结果                                      肝纤维化、肝硬化甚至肝细胞癌，已成为全球性的重大
          3.2.1 扫描电子显微镜观察结果                                  公共卫生挑战 。MAFLD发病机制复杂，“多重打击学
                                                                         [11]
              Control组细胞形态完整，表面光滑、微绒毛丰富，未                    说”认为，脂毒性、胰岛素抵抗、内质网应激、线粒体功能
          见明显孔洞形成。Model 组细胞呈现典型焦亡特征：细                        障碍和慢性炎症之间的复杂交互作用，共同驱动该疾病
          胞肿胀；膜表面微绒毛消失，可见大量散在或密集的穿                           进展。其中，MASH作为MAFLD进展的关键阶段，其核









               A. Control组          B. Model组          C. HQHF-L组          D. HQHF-M组          E. HQHF-H组
                                 图1 各组细胞形态学观察的扫描电子显微镜图（标尺：5 μm）








               A. Control组          B. Model组          C. HQHF-L组          D. HQHF-M组          E. HQHF-H组
                                图2 各组细胞形态学观察的相差荧光显微镜图（标尺：50 μm）


          中国药房  2026年第37卷第7期                                                 China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 7    · 867 ·
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