Page 41 - 《中国药房》2026年3期

2.1.2 分组、造模与给药 值、BALF中白细胞数量均显著降低/减少（P＜0.01）。
将大鼠随机分为空白组、模型组、连翘-金银花药对 表1 各组大鼠 W/D 比值和 BALF 中白细胞数量比较
组，每组10只。除空白组外，其余各组大鼠均通过气管滴 （x±s，n＝6）
[12]
注5 mg/mL LPS复制ALI模型 。造模后，连翘-金银花 组别 W/D比值 BALF中白细胞数量（×10 L ）
－1
6
药对组大鼠灌胃 2.55 g/kg 连翘-金银花药对冻干粉（用 空白组 4.86±0.14 73.67±3.20
[13]
生理盐水溶解，剂量根据临床等效剂量换算 ），空白组 模型组 7.51±0.61 a 194.33±4.72 a
连翘-金银花药对组 5.12±0.18 b 78.5±6.66 b
和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水，每天1次，连续3 d。
a：与空白组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01。
2.1.3 样本采集
2.1.6 大鼠BALF中炎症因子水平检测
末次给药0.5 h后，麻醉大鼠，腹主动脉取血，将血样
取“2.1.3”项下各组大鼠 BALF（每组取 6 只大鼠样
在室温下静置2 h后，以3 000 r/min离心10 min，收集上
本）适量，根据ELISA试剂盒说明书方法操作，检测大鼠
层血清，用于后续外泌体的提取。腹主动脉取血后，结
BALF中TNF-α、IL-1β、IL-10水平。结果（表2）显示，与
扎大鼠右肺，左肺用无菌磷酸盐缓冲液（PBS）灌洗3次；
空白组比较，模型组大鼠 BALF 中 TNF-α、IL-1β 水平均
收集PBS灌洗液，以300 r/min离心15 min，取上清液，即
显著升高（P＜0.01），IL-10 水平显著降低（P＜0.01）；与
得BALF。将BALF置于－80 ℃冰箱中保存，备用。
模型组比较，连翘-金银花药对组大鼠 BALF 中 TNF-α、
2.1.4 大鼠肺组织病理学形态观察
IL-1β 水平均显著降低（P＜0.01），IL-10 水平显著升高
取“2.1.3”项下结扎的大鼠右肺（每组取 4 只大鼠的
（P＜0.01）。
样本），置于4%多聚甲醛中固定24 h，经包埋、切片后进
表2 各组大鼠BALF中TNF-α、IL-1β、IL-10水平比较
行脱蜡复水、苏木素-伊红（HE）染色，然后采用显微镜观 （x±s，n＝6，pg/mL）
察大鼠肺组织病理学形态。结果（图 1）显示，与空白组
组别 TNF-α IL-1β IL-10
比较，模型组大鼠肺泡壁与支气管壁增厚，肺泡腔破损、 空白组 109.46±7.08 64.66±4.79 126.22±6.44
充血，肺泡间隙与支气管管腔中出现大量炎症细胞浸 模型组 162.73±6.53 a 119.92±7.99 a 104.26±2.51 a
润；与模型组比较，连翘-金银花药对组大鼠肺组织充血 连翘-金银花药对组 136.09±3.04 b 83.63±3.84 b 119.56±3.39 b
程度减轻，肺部损伤明显改善。 a：与空白组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01。
2.2 大鼠血清外泌体高通量测序实验
2.2.1 大鼠血清外泌体的提取与表征
取“2.1.3”项下各组大鼠血清样品，采用差速离心
法 提取外泌体，将富含外泌体的沉淀重悬于 PBS 中，
[14]
A.空白组 B.模型组 采用动态光散射技术和透射电镜对外泌体的大小和形
态进行表征，并利用 Western blot 法对外泌体特异性蛋
白（Alix、CD63和CD81）进行表征。结果（图2）显示，血
清外泌体呈茶托样双层膜结构，其粒径为（92.07±0.43）
nm，多分散系数为 0.29±0.01，特异性蛋白 Alix、CD63
C.连翘-金银花药对组 和CD81均存在表达。
注：绿色箭头所指为炎症细胞浸润；黑色箭头所指为肺泡腔充血；
蓝色箭头所指为肺泡壁增厚。 15
图1 各组大鼠肺组织病理学形态观察的显微图（HE 10
染色） 强度 5

2.1.5 大鼠肺组织湿干重比与BALF中白细胞数量测定 0 0.1 1 10 100 1 000 10 000
取“2.1.3”项下结扎的大鼠右肺（每组取 6 只大鼠的 粒径/nm
A.外泌体粒径 B.外泌体形态
样本），称定湿重（记为 W），然后将其置于 50 ℃条件下
Alix 96 kDa
烘干至恒重（记为 D），计算肺组织湿干重比（即 W/D 比
值）。各组取6只大鼠的BALF适量，离心后取沉淀重悬 CD63 36 kDa
于PBS中，再置于显微镜下观察并进行白细胞计数。采 CD81 26 kDa
用 GraphPad Prism 8.0 软件对数据进行统计分析，数据 空白组 模型组 连翘-金银花
药对组
以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一步 C.外泌体中特异性蛋白表达的电泳图
图2 血清外泌体的表征结果
组间两两比较使用Tukey’s多重检验；检验水准α＝0.05
（下同）。结果（表 1）显示，与空白组比较，模型组大鼠 2.2.2 外泌体中差异表达miRNA的筛选
W/D 比值、BALF 中白细胞数量均显著升高/增多（P＜ 取“2.1.3”项下各组大鼠血清样品，按外泌体 RNA
0.01）；与模型组比较，连翘-金银花药对组大鼠 W/D 比 提取试剂盒说明书操作，提取血清外泌体中总 RNA，利

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