Page 40 - 《中国药房》2026年3期
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could  significantly  elevate  the  level  of  IL-10  in  the  cell  supernatant （P＜0.01），  while  significantly  reducing  the  levels  of  TNF-α
          and IL-1β in the cell supernatant， as well as the mRNA and protein expression levels of protein kinase B1， phosphatidylinositol 3-
          kinase，  and  HIF-1α （P＜0.01）.  CONCLUSIONS  F.  suspensa-L.  japonica  herb  pair  can  alleviate  inflammatory  responses  and
          thereby exert a therapeutic effect in improving ALI by up-regulating the expression of miR-345-3p in serum exosomes and inhibiting
          the activity of the HIF-1 signaling pathway.
          KEYWORDS     Forsythia  suspensa-Lonicera  japonica  herb  pair；  acute  lung  injury；  exosomes；  miR-345-3p；  HIF-1  signaling
          pathway； high-throughput sequencing technology



              急性肺损伤（acute lung injury，ALI）是由多种致病              教授鉴定均为真品。大鼠血清肿瘤坏死因子 α（tumor
          因素引发的弥漫性肺实质损害，以肺泡上皮细胞与血管                            necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素 1β（interleukin-
          内皮细胞结构性损伤为主要病理特征，常伴随急性、低                            1β，IL-1β）、IL-10 酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒和
          氧性呼吸衰竭及失控性炎症反应               [1―2] 。目前，临床针对         人源细胞 TNF-α、IL-1β、IL-10 ELISA 试剂盒（货号分别
          ALI常采用糖皮质激素、抗炎药物等进行治疗，但这些药                          为YJ002859、YJ003057、YJ002813、YJ077385、YJ05805、
          物存在副作用大、疗效单一等不足。因此，研发新的治                            YJ064299）均购自上海源桔生物科技中心；兔源分化抗
          疗ALI的药物具有重要意义。                                      原簇 81（cluster of differentiation 81，CD81）、CD63、缺氧
              连 翘 Forsythia  suspensa（Thunb.）Vahl 和 金 银 花     诱导因子1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）、凋亡
          Lonicera japonica Thunb. 均具有清热解毒、疏风散热的              链接基因 2 相互作用蛋白 X（apoptosis-linked gene 2-in‐
              [3]
          功效 ，临床上常将两者配伍，用于治疗 ALI 等肺部疾                         teracting protein X，Alix）抗体（货号分别为 27855-1-AP、
          病 [4―5] 。然而，连翘-金银花药对改善 ALI 等肺部疾病的                   25682-1-AP、12422-1-AP、80933）均购自武汉三鹰生物
          具体作用机制尚不明确。外泌体是活细胞分泌的一种                             科技有限公司；兔源磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylino‐
          膜性囊泡，其含有的微 RNA（microRNA，miRNA）可通
                                                              sitol 3-kinase，PI3K）、蛋白激酶 B1（protein kinase B1，
          过调控靶基因表达参与炎症、氧化应激及免疫应答                      [6―8] 。  Akt1）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）（货号分别为
          研究表明，ALI 患者支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar
                                                              4257s、2938s、2118s）均购自美国 CST 公司；Lipo8000 转
          lavage fluid，BALF）和血浆中外泌体水平均显著高于正                   染试剂（货号 C0511）购自上海碧云天生物技术有限公
          常人，且外泌体水平与患者肺损伤的严重程度密切相                             司；外泌体 RNA 提取试剂盒（货号 4478545）购自美国
            [9]
          关 。此外，外泌体可通过传递miRNA等信号分子调节
                                                              Invitrogen公司；逆转录试剂盒、SYBR预混液（货号分别
                                                    [10]
          炎症反应和细胞凋亡，从而改善脓毒症相关 ALI 。由
                                                              为 K1622、A25742）均购自美国 Thermo Fisher Scientific
          此可知，外泌体在 ALI 病理进程中具有重要作用，可能
                                                              公司；miR345-3p模拟物试剂盒（货号112841965，该试剂
          是改善ALI的关键靶标。基于此，本研究拟采用脂多糖
                                                              盒中包括 miR345-3p 阴性试剂）购自湖州河马生物科技
         （lipopolysaccharide，LPS）构建大鼠 ALI 模型，利用高通
                                                              有限公司。
          量测序技术获得连翘-金银花药对干预后 ALI 大鼠血清
          外泌体中差异表达的miRNA，并进行京都基因与基因组                          1.3 细胞株及动物
                                                                  人肺上皮 BEAS-2B 细胞（货号 QS-H066）购自旗赛
          百 科 全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，
          KEGG）富集分析，以预测相关信号通路并进行验证，以                          生物科技（武汉）有限公司。SPF 级 SD 雄性大鼠（体重
                                                              180～200 g）购自山东济南朋悦实验动物繁育有限公
          期为连翘-金银花药对临床治疗ALI提供实验依据。
                                                              司，动物生产许可证号为 SCXK（鲁）2022-0006。购入
          1 材料
          1.1 主要仪器                                            后，大鼠饲养于温度、湿度可控，12 h 明/12 h 暗交替的
                                                              环境中，饲养期间自由饮水、摄食。本动物实验已获河
              本研究所用主要仪器有 Multiskan GO 型全波长酶
                                                              南中医药大学实验动物伦理委员会批准，批准编号为
          标仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、JEM-1400 型
          透射电子显微镜（日本电子株式会社）、SLAN-96P 型实                       DWLLGZR202202204。
          时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）仪（上海宏石医疗科                          2 方法与结果
          技有限公司）、CytoFLEX 型流式细胞仪（美国 Beckman                   2.1 体内药效学实验
          Coulter 公司）、NovaSeq 型高通量基因测序仪（美国 Illu‐              2.1.1 药材提取
          mina 公司）、ICX41 型生物显微镜（宁波舜宇仪器有限                          研究表明，连翘、金银花以1∶1（质量比）配伍时抗炎
                                                                      [11]
          公司）。                                                效果最佳 。因此，本研究将连翘、金银花药材以质量
          1.2 主要药品与试剂                                         比 1∶1 配伍，经打粉、过筛后，加入 10 倍量蒸馏水，加热
              连翘（批号23040201，产地为山西临汾）、金银花（批                    回流提取1 h；过滤，药渣再次加入8倍量蒸馏水，加热回
          号 23030101，产地为河南封丘）药材均购自郑州瑞龙国                       流提取 1 h；合并 2 次滤液，浓缩成稠浸膏，冻干，即得连
          药医药股份有限公司，经河南中医药大学药学院董诚明                            翘-金银花药对冻干粉（得率为33%）。


          · 306 ·    China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 3                               中国药房  2026年第37卷第3期
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