Page 46 - 《中国药房》2026年3期
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miRNA-204  mimics，  the  mRNA  it’s  protein  expressions  of  α -SMA，  Collagen Ⅰ ，  NUAK1，  and  YAP  in  HSC-T6  cells  were
          significantly  decreased （P＜0.05），  while  the  mRNA  and  protein  expressions  of  LATS1  and  the  mRNA  expression  of  MST1  were
          significantly  increased （P＜0.05）.  Conversely，  the  results  were  opposite  following  transfection  with  miRNA-204  inhibitors.
          CONCLUSIONS  TFCTL  can  exert  anti-hepatic  fibrosis  effects  by  up-regulating  the  expression  of  miRNA-204，  thereby  down-
          regulating  the  expressions  of  NUAK1，  inactivating  the  Hippo/YAP  pathway，  which  in  turn  suppresses  the  activation  of  HSC  and
          promotes their apoptosis.
          KEYWORDS     total  flavonoids  from  Carthamus  tinctorius  L.；  miRNA-204/NUAK1/Hippo  signaling  axis；  Hippo/YAP  pathway；
          hepatic stellate cell； hepatic fibrosis； apoptosis


              肝纤维化是慢性肝损伤后组织修复失衡引发的病                           TFCTL）是红花的主要活性成分，具有抗炎和抗纤维化
                                                                  [13]
          理状态，其核心机制为细胞外基质（extracellular matrix，               活性 。然而，TFCTL 是否可通过调控 miRNA-204/
          ECM）的合成与降解失衡，导致肝实质内 ECM 异常沉                         NUAK1/Hippo 信号轴抑制 HSC 活化，进而发挥抗肝纤
                                  [1]
          积，进而破坏肝脏正常结构 。活化的肝星状细胞（he‐                          维化的作用尚不明确。基于此，本研究拟基于 miRNA-
          patic stellate cell，HSC）是产生ECM的核心细胞，当肝损             204/NUAK1/Hippo信号轴探讨TFCTL抑制HSC活性的
          伤 发 生 时 ，HSC 受 到 转 化 生 长 因 子 β（transforming         作用，并进一步研究TFCTL抗肝纤维化的作用机制，以
          growth factor β，TGF-β）、肿瘤坏死因子α等细胞因子的                期为临床应用TFCTL治疗肝纤维化提供实验依据。
          刺激，转化为具有增殖活性、纤维生成能力、促炎作用及                           1 材料
          收缩功能的肌成纤维细胞，并伴随 α-平滑肌肌动蛋白                           1.1 主要仪器
         （α-smooth muscle actin，α-SMA）水平的升高以及Ⅰ型胶                  CT15RE 型高速台式冷冻离心机购自日本 Hitachi
          原蛋白（type Ⅰ collagen，Collagen Ⅰ）等 ECM 成分的异
                                                              公司；7500 Fast 型荧光定量聚合酶链式反应（PCR）仪、
                [2]
          常沉积 。因此，抑制 HSC 活化，减少 ECM 合成可能是
                                                              M16710-3354 型漩涡振荡器均购自美国 Thermo Fisher
          逆转肝纤维化的重要策略。
                                                              Scientific 公司；DYY-6C 型电泳仪购自北京六一生物科
              研究发现，微 RNA（microRNA，miRNA）是肝纤维
                                                              技有限公司；ODYSSEY clx型近红外激光成像系统购自
          化表观遗传调控的关键分子，具有多靶点干预潜力，如
                                                              基因有限公司；DMIL LED Fluo型荧光显微镜购自德国
          miRNA-29b 可 靶 向 胶 原 基 因 抑 制 ECM 合 成         [3―4] ；  Leica 公司；NovoCyte 2040R 型流式细胞仪购自安捷伦
                                                        [5]
          miRNA-4465 可 通 过 修 饰 外 泌 体 抑 制 HSC 活 化 ；
                                                              生物（杭州）有限公司。
          miRNA-204 可通过激活 UNC-51 样激酶 1 转录、增强巨                 1.2 主要药品与试剂
                                    [6]
          噬细胞自噬，抑制 HSC 活化 。本课题组前期通过
                                                                  TFCTL 提 取 物 由 本 课 题 组 前 期 制 备（批 号
          TargetScan数据库预测，发现NUAK1是miRNA-204的直
                                                              C294220505，TFCTL含量为60%～65%）；miRNA-204模
          接靶基因；进一步查阅文献发现，NUAK家族SNF1样激
                                                              拟物转染试剂、miRNA-204 模拟物阴性对照转染试剂、
          酶 1（NUAK family SNF1-like kinase 1，NUAK1）在纤维
                                                              miRNA-204抑制剂转染试剂、miRNA-204抑制剂阴性对
          化组织中高表达，下调NUAK1表达可抑制Hippo/Yes相
                                                                                   TM
                                                              照转染试剂、Ribo FECT  CP 转染试剂盒（批号分别为
          关蛋白（Yes-associated protein，YAP）通路活性，从而减
                   [7]
          轻纤维化 。另有研究发现，Hippo/YAP 通路是调控                        V0722、W0828、R0516、S1127、X0220）均购自广州锐博
                                                              生物技术有限公司；DAPI染色液、Annexin Ⅴ-FITC细胞
                                             [8]
          HSC 活化与纤维化进展的核心通路之一 ，其核心效应
          分子 YAP、含 PDZ 结合基序的转录共激活因子（tran‐                     凋亡检测试剂盒（批号C1062M）购自上海碧云天生物技
          scriptional co-activator with PDZ-binding motif，TAZ）的  术 股 份 有 限 公 司 ；兔 源 α -SMA、Collagen  Ⅰ 、YAP、
                                                 [9]
          核易位，可驱动 HSC 向肌成纤维细胞转化 。此外，                          LATS1 抗 体（批 号 分 别 为 bs-10196R、bs-10423R、bs-
          NUAK1 还可通过磷酸化大肿瘤抑制激酶 1（large tumor                  3605R、bs-2904R）均购自北京博奥森生物技术有限公
          suppressor kinase 1，LATS1）调控 YAP 表达，从而影响            司 ；兔 源 甘 油 醛 -3- 磷 酸 脱 氢 酶（GAPDH）、MST1、
                   [10]
          HSC 活 性 。 哺 乳 动 物 STE20 样 激 酶 1（mammalian           NUAK1 抗 体（ 批 号 分 别 为 00195792、00075987、
          STE20-like kinase 1，MST1）为 LATS1 的上游激酶，可通           00050172）均购自武汉三鹰生物技术有限公司；山羊抗
                                [11]
          过磷酸化作用激活LATS1 ；当MST1、LATS1表达上调                      兔荧光二抗（批号A23920）购自武汉艾美捷科技有限公
                                                       [12]
          时，Hippo/YAP 通路被抑制，从而降低 YAP 转录活性 。                   司；牛血清白蛋白（批号A8020）购自北京索莱宝科技有
          由此可知，miRNA-204/NUAK1/Hippo 信号轴与 HSC 活               限公司；miRcute 增强型 miRNA cDNA 第一链合成试剂
          性密切相关，可能是肝纤维化治疗的新靶点。                                盒（批号 KR211）购自天根生化科技（北京）有限公司；
              红花是菊科植物红花 Carthamus tinctorius L. 的干            DMEM 培养基（批号 6124441）购自美国 Gibco 公司；
          燥花，性辛、温，归心、肝经，具有活血通经、散瘀止痛的                          TGF-β（批号0713AF354-1，纯度≥98%）购自美国Pepro‐
          功效。红花总黄酮（total flavonoids from C.tinctorius L.，     Tech公司。


          · 312 ·    China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 3                               中国药房  2026年第37卷第3期
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