Page 41 - 《中国药房》2025年22期

2.4 当归有机酸提取物的表征及抗氧化活性检测 2.4.3 抗氧化活性检测
[16]
2.4.1 SEM观察 按照 Yamauchi 等 的方法，检测 DESs 提取物的
取当归饮片，以 70% 甲醇回流提取（100 ℃、30 DPPH 自由基清除能力：将 DPPH 工作液 225 μL 与不同
min），抽滤，滤液经冷冻干燥，得甲醇提取物。取等量当 质量浓度的 DESs 提取物溶液（以乙醇为溶剂，下同）50
归饮片，按“2.3”项下最优工艺提取，抽滤，滤液经冷冻干 μL混匀，于暗处反应30 min后，使用酶联免疫分析仪于
燥，得DESs提取物。取当归饮片和上述各提取物适量， 517 nm波长处测定其吸光度（Ai ）；将无水乙醇225 μL分
分别置于铜网上，进行SEM观察。结果显示，当归饮片 别与不同质量浓度的当归有机酸提取物溶液 50 μL 混
表面光滑（图6A）；甲醇提取物的团聚度降低，表面松散 匀，于暗处反应 30 min 后，使用酶联免疫分析仪于 517
（图6B）；DESs提取物的团粒结构几乎消失，且颗粒表面 nm波长处测定其吸光度（Aj ）；将DPPH工作液225 μL与
有类似肠壁的褶皱（图6C）。 无水乙醇50 μL混匀后，使用酶联免疫分析仪于517 nm
波长处测定其吸光度（A0 ）。按下式计算当归有机酸提
取物的 DPPH 自由基清除率：DPPH 自由基清除率＝
[A0－（Ai－Aj ）]/A0×100%。以维生素 C 为阳性对照，以
甲醇提取物为参照，同法检测两者的 DPPH 自由基清
除率。
[17]
参考Kut等 的方法（Trolox标准曲线法）并略作修
改，检测DESs提取物的ABTS自由基清除能力：先配制
A.当归饮片 B.甲醇提取物
ABTS自由基储备液，再配制0～1.0 mmol/L的Trolox系
列液。取 Trolox 系列液 10 μL 与试剂盒工作液 1 mL 混
匀，避光放置 15 min，使用酶联免疫分析仪于 725 nm 波
长处检测吸光度，并绘制吸光度-溶液浓度的标准曲线；
再取DESs提取物样品10 μL，加入ABTS自由基储备液
1 mL，混匀，避光放置 15 min，使用酶联免疫分析仪于
725 nm 波长处检测吸光度，代入上述标准曲线计算得
C. DESs提取物
图6 当归饮片及其有机酸提取物的SEM图 Trolox 等效浓度，用以反映 ABTS 自由基清除能力。以
维生素 C 为阳性对照，以甲醇提取物为参照，同法检测
2.4.2 FTIR扫描
两者的ABTS自由基清除能力。
取“2.4.1”项下当归的甲醇提取物和DESs提取物各
结果（图8）显示，当样品质量浓度为2.5～25 μg/mL
适量，进行 FTIR 扫描。结果（图 7）显示，3 397、3 207
时，各样品的DPPH、ABTS自由基清除率均随其质量浓
－1
cm 处的峰分别为绿原酸、阿魏酸中羟基的伸缩振动
－1
峰，2 868 cm 处的峰归属于亚甲基的伸缩振动峰，1 643、 度增加而增大；DESs 提取物对上述自由基的清除能力
均较甲醇提取物强，且普遍与阳性对照相当，提示其具
－1
1 482 cm 处的峰分别为阿魏酸、绿原酸苯环骨架中碳-
有一定的抗氧化活性。
－1
碳双键的骨架振动峰，1 143、1 057 cm 处的峰分别归属
于阿魏酸羧基、甲氧基的伸缩振动峰，1 005 cm 处的峰 80 维生素C （ mmol/L ） 1.50 维生素C
－1
DESs提取物
为绿原酸奎尼酸酯键的伸缩振动峰，956 cm 处的峰反 60 甲醇提取物 1.49 DESs提取物
－1
甲醇提取物
映阿魏酸反式肉桂酸中烯烃碳-氢面内的摇摆振动。根 DPPH自由基清除率/% 40 1.48
据各特征峰强度及峰面积积分推测，与70%甲醇提取相 20 ABTS自由基清除能力/ 1.47
比，DESs提取当归有机酸更具优势。 0 2.5 5 10 15 20 25 1.46 2.5 5 10 15 20 25
样品质量浓度/（μg/mL） 样品质量浓度/（μg/mL）
0.80 B. ABTS自由基
1 057 956 A. DPPH自由基
0.70 图8 当归有机酸提取物的抗氧化活性折线图
3 397 3 207
0.60 2 868 1 643 1 482 1 143 2.5 提取机制分析
0.50
吸光度 0.40 1 005 DESs提取物 基于 DFT 程序 ORCA 5.0.3 在相同泛函和基组水平
0.30 下分别对阿魏酸、绿原酸、HBA、HBD 进行分子结构优
化，并采用Multiwfn 3.8 dev软件和VMD 1.9.3可视化程
0.20
甲醇提取物
0.10 序探究分子单体的表面静电势。随后，借助 Molclus 平
0 台构建 DESs、DESs 与阿魏酸、DESs 与绿原酸的团簇构
4 000 3 500 3 000 2 500 2 000 1 500 1 000 500
波数/cm －1 型（初始构象均为 1 000 个），选出能量最低的作为后续
图7 当归有机酸提取物的FTIR图 优化的初始构象；进一步参考表面静电势极值及分子间
中国药房 2025年第36卷第22期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 22 · 2787 ·