Page 28 - 《中国药房》2025年18期
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为 48.75%、67.97%；而各组裸鼠体重比较的差异均无统                    （HepG2 细胞）进行后续实验。本克隆形成实验结果显
          计学意义（P＞0.05）。结果见图6、表4。                              示，PP9 可减弱 HepG2 细胞的集落形成能力，提示该成
             800  对照组                28   对照组                 分可抑制肝癌细胞的增殖。此外，本裸鼠移植瘤实验结
                  5-Fu组              26   5-Fu组               果表明，PP9可显著抑制裸鼠的肿瘤生长，但对裸鼠体重
                  PP9组
            瘤体体积/mm 3  400      a   裸鼠体重/g  24                无明显影响，提示该成分具有一定的抑瘤作用，且毒性
                                          PP9组
             600
                                     22
             200
              0                 a    20                       较低。Ki-67 是细胞核内与增殖相关的核蛋白，是评价
                                     18
                                                              肿瘤细胞增殖活性的重要指标 。本裸鼠移植瘤实验
                                                                                         [20]
               0    3    6    9   12  15  18  21  24  27  0    3    6    9   12  15  18  21  24  27
                      时间/d                    时间/d            结果还显示，PP9 组裸鼠肿瘤组织中 Ki-67 蛋白的表达
             a：与对照组比较，P＜0.01。
                                                              较对照组显著下调。以上研究结果均表明，PP9 具有抗
          图6 各组裸鼠瘤体体积、体重变化折线图（x±s，n＝6）
                                                              HCC的作用。
          表4 各组裸鼠的瘤体质量及相关蛋白表达水平比较
                                                                  细胞凋亡是细胞程序性死亡的重要生理过程，诱导
               （x±s，n＝6）                                                                                 [21―22]
                                                              肿瘤细胞凋亡是相关药物发挥抗肿瘤作用的关键                         。
           组别        瘤体质量/g          Ki-67      cleaved caspase-3  本研究结果显示，PP9 可显著升高 HepG2 细胞的凋亡
           对照组       0.52±0.08      0.35±0.02     0.05±0.01
           5-Fu组     0.26±0.03 a    0.27±0.02 b   0.15±0.01 b  率，提示该成分的抗 HCC 作用可能是通过促进肝癌细
           PP9组      0.19±0.02 a    0.25±0.01 b   0.19±0.02 b  胞凋亡来实现的。细胞凋亡受多种信号通路调控，其中
             a：与对照组比较，P＜0.01；b：与对照组比较，P＜0.05。
                                                              Fas/FasL 信号通路是重要途径之一。Fas 是肿瘤坏死因
          3.2.2 PP9对裸鼠肿瘤组织中相关蛋白表达的影响                          子家族中的一种重要细胞膜表面受体蛋白，其配体FasL
              与对照组比较，5-Fu 组、PP9 组裸鼠肿瘤组织中 Ki-                  属于Ⅱ型跨膜蛋白 ，两者结合后可招募 Fas 相关死亡
                                                                              [23]
          67 蛋白的表达均显著下调（P＜0.05），cleaved caspase-3             结构域蛋白，形成死亡诱导信号复合物，该复合物的形
          蛋白的表达均显著上调（P＜0.05）。结果见图7、表4。                        成可直接导致caspase-8前体的募集和自体剪切，生成具
                                                              有活性的 cleaved caspase-8；同时，作为 Fas/FasL 信号通
           Ki-67                                              路的关键下游效应分子，cleaved caspase-8可进一步剪切
                                                              caspase-3前体，使其转化为具有活性的cleaved caspase-3，
                                                                                          [24]
                                                              最终启动不可逆的细胞凋亡程序 。此外，已有研究报
           cleaved caspase-3                                  道，激活Fas/FasL信号通路可抑制肝癌细胞的恶性生物
                                                                    [25]
                                                              学行为 。本研究结果显示，与对照组比较，不同浓度PP9
                A.对照组           B. 5-Fu组       C. PP9组        组细胞中 Fas、FasL、cleaved caspase-8、cleaved caspase-3 蛋
             黑色箭头：阳性表达蛋白。                                     白的表达均显著上调，且亦在移植瘤裸鼠肿瘤组织中检
          图7 各组裸鼠肿瘤组织中 Ki-67、cleaved caspase-3 蛋              测到了cleaved caspase-3蛋白表达的上调，提示PP9的抗
               白表达的免疫组化图（标尺：20 μm）                            HCC 活性可能与激活 Fas/FasL 信号通路有关。为验证
          4 讨论                                                上述假设，本研究引入了 Fas 抑制剂 KR-33493，结果显
              HCC 发病隐匿，患者确诊时常处于中晚期，平均 5                       示，抑制剂单用对 Fas、FasL、cleaved caspase-8、cleaved
                           [16]
          年生存率低于 20% 。目前，临床治疗以 5-Fu、索拉非                       caspase-3蛋白的表达无显著影响（排除非特异性干扰），
          尼、仑伐替尼、贝伐珠单抗和阿替利珠单抗等药物为主，                           而 PP9 与 KR-33493 联用则可显著逆转 PP9 对 HepG2 细
          但由于耐药性以及皮肤毒性、胃肠道反应、全身性不良                            胞中 Fas、FasL、cleaved caspase-8、cleaved caspase-3 蛋白
          反应、高血压等副作用的发生，使得上述药物的临床应                            表达的上调作用，提示 PP9 可能通过激活 Fas/FasL 信号
          用受限 。天然产物因具有低毒性、多靶点和高疗效等                            通路来诱导肝癌细胞凋亡。
                [3]
          特点，逐渐成为抗肿瘤药物研发的重要方向 。                                   综上所述，细胞实验证实，PP9可通过激活Fas/FasL
                                               [17]
              甾体皂苷是一类重要的天然产物，对包括肝癌在内                          信号通路来诱导 HepG2 细胞凋亡；动物实验证实，其能
          的多种肿瘤细胞具有明显的抑制作用                [18―19] 。PP9是从宽     有效抑制裸鼠移植瘤的生长。上述研究提示，PP9 有望
          叶重楼中分离鉴定的一种天然甾体皂苷，已有研究者通                            成为一种潜在的 HCC 治疗候选药物，但其是否涉及其
          过 MTT 实验初步证实了其对 SMMC-7721 细胞增殖的                     他抗肿瘤机制尚有待进一步探索。
          抑制作用 。为进一步评价PP9的抗HCC活性，本研究                          参考文献
                  [11]
          首先采用 CCK-8 实验对 3 种人肝癌细胞系（HepG2、                     [ 1 ]  BRAY F，LAVERSANNE M，SUNG H，et al. Global can‐
          SMMC-7721、Bel-7404）进行了体外活性筛选。结果显                         cer  statistics  2022：GLOBOCAN  estimates  of  incidence
          示，PP9可抑制上述细胞的增殖，且有一定的浓度、时间                               and mortality worldwide for  36  cancers in 185  countries
          依赖趋势；同时，从中筛选出对 PP9 最敏感的细胞系                               [J]. CA Cancer J Clin，2024，74（3）：229-263.


          · 2242 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 18                            中国药房  2025年第36卷第18期
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