Page 32 - 《中国药房》2025年18期

20%B→95%B；18～23 min，95%B；23～23.1 min，95%B→ 试品溶液，再按“2.3.3”项下色谱条件进样分析，同法计
5%B；23.1～25 min，5%B）；流速为 0.30 mL/min；柱温为 算得各共有峰相对峰面积的 RSD＜3%，相对保留时间
35 ℃；进样量为5 µL。 的RSD＜2%（n＝6），表明方法重复性良好。
采用电喷雾电离源进行正、负离子扫描和full mass/ 2.3.5 指纹图谱的建立及化学成分的指认
dd-MS 检测；分辨率分别为 70 000（full mass）、17 500 取上山虎药材（编号S1～S10），按“2.1”项下方法制
2
2
（dd-MS），扫描范围为 m/z 100.0～1 000.0；碰撞电压梯 备冻干粉末，按“2.3.1”项下方法制备供试品溶液，再按
度为40、60、80 V（归一化碰撞能量模式）。 “2.3.3”项下色谱条件进样分析，记录色谱图。将10批上
2.2.3 数据分析与结构鉴定 山虎样品的色谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评
取“2.2.1”项下样品溶液，按“2.2.2”项下检测条件进 价系统（2012 版）》，以 S1 作为参照图谱，经多点校正和
样分析，记录色谱、质谱数据，结合 Compound Disco- Marker峰匹配，生成对照指纹图谱（R）和10批上山虎样
verer 3.0 软件进行数据库检索及数据分析，匹配的目标 品的叠加指纹图谱（图 1）。由图 1 可知，10 批样品共有
数据库包含 MzCloud 和 ChemSpider 数据库。结合数据 14个共有峰；各批次上山虎样品图谱与对照指纹图谱的
库信息并检索相关文献 [8―18] ，本研究从上山虎药材中共 相似度为 0.883～0.991，表明广西不同产地上山虎药材
鉴定出60个化学成分，包括黄酮类（芦丁等）、酚酸类（绿 的成分相似。
原酸等）、酯类（棕榈油酸乙酯等）、香豆素类（东莨菪内 7
8 500 1 2 3 4 5 6 8 9 10 11 12 13 14
酯等）和萜类（柠檬醛等）等化学成分（限于篇幅，成分鉴 8 000 R
7 500 S10
定结果可扫描本文首页二维码查看“增强出版”板块中 7 000 S9
6 500
6 000
的附表1）。 5 500 S8
5 000 S7
2.3 HPLC指纹图谱分析 U/mV 4 500 S6
4 000
2.3.1 供试品溶液制备 3 500 S5
3 000
2 500 S4
分别精密称取“2.1”项下各批上山虎药材冻干粉末 2 000
1 500 S3
625.00 mg，置于 5 mL 容量瓶中，加水超声溶解并定容， 1 000 S2
500
即得供试品溶液。 0 S1
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68
2.3.2 混合对照品溶液制备 t/min
分别精密称取新绿原酸、绿原酸、丁香醛对照品 图1 10批上山虎样品的叠加指纹图谱和对照指纹图谱R
1.60、3.95、0.60 mg，置于 5 mL 容量瓶中，加水超声溶解
取“2.3.2”项下混合对照品溶液，按“2.3.3”项下色谱
并定容，即得混合对照品溶液。
条件进样分析，记录色谱图（图 2）。通过将混合对照品
2.3.3 色谱条件
溶液图谱与对照指纹图谱进行比对，共指认3个共有峰，
以 Agilent 5 TC-C18 （2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）为
依次为新绿原酸（峰5）、绿原酸（峰7）、丁香醛（峰10）。
色谱柱；以0.3%磷酸溶液（A）-甲醇（B）为流动相进行梯
1 600 7
度洗脱（0～15 min，10%B→18%B；15～20 min，18%B→ 1 500
1 400
1 300
19%B；20～28 min，19%B→25%B；28～30 min，25%B→
1 200
27%B；30～36 min，27%B；36～40 min，27%B→30%B； 1 100 5
1 000
40～50 min，30%B→36%B；50～60 min，36%B→39%B； U/mV 900 10 R
800
60～70 min，39%B→43%B）；流速为0.9 mL/min；柱温为 700
600
500
30 ℃；检测波长为296 nm；进样量为10 μL。 400
300
2.3.4 方法学考察 200
100
取“2.3.1”项下供试品溶液（编号S6），按“2.3.3”项下 0 混合对照品溶液
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68
色谱条件连续进样 6 次，以峰 7（峰面积较大、出峰稳定 t/min
且保留时间适中）为参照峰，计算得各共有峰相对峰面 5：新绿原酸；7：绿原酸；10：丁香醛。
图2 混合对照品溶液图谱与对照指纹图谱R的比对结果
积的RSD＜3%，相对保留时间的RSD＜2%（n＝6），表明
方法精密度良好。取“2.3.1”项下供试品溶液（编号S6）， 2.3.6 化学模式识别分析
分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.3.3”项下色 （1）系统聚类分析：分别将 10 批上山虎药材的共有
谱条件进样分析，同法计算得各共有峰相对峰面积的 峰峰面积导入SPSS 27软件，采用组间联接法，以平方欧
RSD＜3%，相对保留时间的RSD＜2%（n＝6），表明供试 氏距离作为度量标准进行系统聚类分析。结果（图3）显
品溶液在室温下放置 24 h 内稳定。取“2.1”项下上山虎 示，当平方欧氏距离为 25 时，10 批上山虎样品被分为 2
药材（编号S6）冻干粉末6份，按“2.3.1”项下方法制备供 类，其中S3、S4为一类，其余批次为一类；当平方欧氏距

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