Page 49 - 《中国药房》2025年14期

was constructed， and the in vivo tumor targeting of NPs combined with ultrasound irradiation was investigated by small animal in
vivo imaging technology. RESULTS NPs combined with ultrasound irradiation could significantly inhibit the proliferation of M109
cells， and the optimal ultrasound time was 1 h after administration. The free folic acid could antagonize the inhibitory effect of NPs
on the proliferation of M109 cells， and combined with ultrasound irradiation could partially reverse this antagonism. Compared with
A549 cells， the uptake rate of NPs in M109 cells was significantly higher （P＜0.01）， and ultrasound irradiation could promote
cellular uptake. NPs combined with ultrasound irradiation could inhibit the migration and invasion of M109 cells and block the cell
cycle in the G0/G1 and G2/M phases. Compared with control group， the apoptosis rate of M109 cells and ROS level were increased
significantly （P＜0.01）， while the MMP decreased significantly （P＜0.01） in the different concentration （100， 200， 300 μg/mL）
groups of M109 cells. Compared with the mice in non-ultrasound group， the fluorescence intensity and tumor-targeting index of the
tumor site in the 0 h ultrasound group were significantly enhanced （P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS NPs combined with
ultrasound irradiation have a strong targeting effect on M109 cells in vitro and in vivo， the anti-tumor mechanism includes inhibiting
cell migration and invasion， blocking cell cycle， and inducing apoptosis.
KEYWORDS folic acid-modified nanoparticles； ultrasonic irradiation； M109 cells； tumor targeting； anti-tumor mechanism

肺癌是世界范围内发病率和病死率最高的一种恶 1 材料
[1]
性肿瘤，尚无理想治疗手段 。智能纳米载药系统是治 1.1 主要仪器
疗肿瘤的一种新方法，其表面通常会修饰肿瘤特异性配 本研究所用的主要仪器有 M90 SCI 型兽用彩色多
体[如抗体、多肽、转铁蛋白和叶酸（folic acid，FA）等]，能 普勒超声系统（深圳迈瑞动物医疗科技股份有限公司）、
响应特定的外部或内部刺激（如酶、pH、温度、光学和磁 Varioskan LUX 型多功能酶标仪（美国 Thermo Fisher
性等），使纳米粒靶向到肿瘤部位，用于肿瘤的精准治 Scientific 公司）、MF52-N 型倒置荧光显微镜（广州市明
[2]
疗 。FA 具有廉价易得、安全无毒、相对分子质量小的 美光电技术有限公司）、FACSCelesta 型流式细胞仪（美
优势，与叶酸受体（folate receptor，FR）具有高度的亲和 国 BD 公司）、IVIS Lumina Series Ⅲ型小动物活体成像
力，而FR存在于大多数肿瘤细胞表面，在正常机体细胞 仪（美国 PerkinElmer 公司）、BPN-190CH 型二氧化碳培
中不表达或很少表达，因此 FA 常被作为理想的肿瘤主 养箱（上海一恒科学仪器有限公司）、HH-2 型恒温水浴
[3]
动靶向配体 。声动力疗法是一种非入侵性的治疗方 锅（常州国华电器有限公司）、L550型低速大容量离心机
法，使用的超声波具有良好的组织穿透能力，且安全无 （上海卢湘仪离心机仪器有限公司）。
1.2 主要药品与试剂
创、可控性强，在肿瘤的诊断和治疗方面均具有较好的
NPs[Cre 含量为 6 g/L、包封率为 83.78%、粒径为
[4]
应用前景 。超声波的空化效应会导致血管内皮细胞间
（247.67±2.49） nm、Zeta 电位为（－9.40±0.54） mV]和
隙增大，从而提高细胞膜的通透性，使更多的纳米粒进
空白NPs（不载Cre）均由云南中医药大学药剂实验室自
入肿瘤组织，增强肿瘤治疗效果 [5―6] 。因此，纳米粒联合
制；胎牛血清、青霉素-链霉素、DMEM培养基、磷酸盐缓
声动力疗法越来越多地应用于肿瘤的治疗。
冲液（PBS）均购自上海达特希尔生物科技有限公司；超
克班宁（crebanine，Cre）是从防己科千金藤属植物
声耦合胶购自天津津亚科技发展有限公司；CCK-8试剂
云南地不容Stephania Yunnanensis H.S.Lo及其他几种同
盒（批号ATWD07091）购自亚科因（武汉）生物技术有限
[7]
属植物中提取得到的异喹啉类阿朴菲型生物碱 。研究
公司；Matrigel 基质胶购自美国 Corning 公司；FA（批号
发现，Cre 对多种肿瘤细胞均具有一定的抑制作用 [8―9] 。
CR2204101，纯度98%）、DAPI染料（批号CR2307030）均
然而Cre毒性大、水溶性差、半衰期短的缺点限制了其临
购自武汉赛维尔生物科技有限公司；细胞周期检测试剂
床应用。为解决以上问题，本课题组前期制备了 FA 修
盒（批号 2406263）购自武汉普美克生物技术有限公司；
饰的 Cre 纳米粒（FA-Cre@PEG-PLGA NPs，以下简称 细胞凋亡试剂盒（批号MA0220-2）购自大连美仑生物技
“NPs”），其以FA修饰的聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚 术有限公司；活性氧（reactive oxygen species，ROS）检测
物（PEG-PLGA-FA）为外壳，内部包载药物 Cre、荧光染 试剂盒（批号 011124240515）购自上海碧云天生物技术
料（DiR）和液态氟碳（PFP）。NPs 在提高 Cre 生物利用 股份有限公司；JC-10线粒体膜电位（mitochondrial mem‐
度的同时使其具有主动靶向肿瘤细胞的能力；而且与 brane potential，MMP）检测试剂盒（批号 240007002）购
Cre 原药相比，NPs 联合超声辐照具有更好的体外抗肿 自北京索莱宝科技有限公司。
[10]
瘤作用 。在此基础上，本研究通过细胞实验及活体成 1.3 细胞株
像实验探究NPs联合超声辐照对小鼠肺癌M109细胞的 小鼠肺癌M109细胞购自湖南丰晖生物科技有限公
体内外靶向作用，并初步探讨其抗肿瘤机制，以期为后 司；人肺癌 A549 细胞购自武汉普诺赛生命科技有限
续体内药效学研究及临床应用提供参考。 公司。

中国药房 2025年第36卷第14期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 14 · 1731 ·