Page 20 - 《中国药房》2024年24期
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were  increased  significantly （P＜0.05）；  the  pathological  damage  of  liver  tissue  cells  had  improved，  and  the  accumulation  of  liver
          lipids  had  decreased.  The  protein  expressions  of  SIRT1，  Nrf2  and  GPX4  had  been  significantly  upregulated （P＜0.05）.
          CONCLUSIONS  Gexia  zhuyu  decoction  can  regulate  lipid  metabolism，  improve  the  level  of  oxidative  stress，  maintain  Fe
                                                                                                            2+
          homeostasis， and inhibit the process of ferroptosis in juvenile zebrafish with MAFLD， and the above effects may be related to the
          activation of the SIRT1/Nrf2/GPX4 axis.
          KEYWORDS     Gexia  zhuyu  decoction；  metabolic-associated  fatty  liver  disease；  ferroptosis；  SIRT1/Nrf2/GPX4  axis；  network
          pharmacology


              代 谢 相 关 脂 肪 性 肝 病（metabolic-associated  fatty   1.2 主要药品与试剂
          liver disease，MAFLD）原名为非酒精性脂肪性肝病（non-                   膈下逐瘀汤的组方药材包括当归、桃仁、甘草、红
          alcoholic fatty liver disease，NAFLD），是一种临床常见的       花、五灵脂、川芎、牡丹皮、赤芍、乌药、香附、枳壳、延胡
          慢性肝病，可进一步引发非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维                            索，上述药材饮片均购自黑龙江中医药大学第一附属医
                                                [1]
          化、肝硬化和肝细胞癌，最终导致患者肝衰竭 。该病以                           院中药房，经黑龙江中医药大学药学院中药资源教研室
          肝脏脂肪蓄积为主要特征，不仅涉及传统的NAFLD，而                          周博副教授鉴定均为真品。
                                  [2]
          且涵盖其他的肝脏代谢失调 。随着人们生活作息和膳                                异甘草酸镁注射液[批号20211101204，规格10 mL∶
          食习惯的改变，MAFLD 的发病率（全球约 25%，亚洲约                       50 mg（以 C42H60MgO16计）]购自正大天晴药业集团股份
                                                 [3]
          27%）逐年升高，已成为全球性健康问题之一 。目前，                          有限公司；十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-
          运动和饮食是干预 MAFLD 的有效手段，但上述手段存                         PAGE）液、快速转膜缓冲液、BCA 蛋白定量试剂盒、
          在一定的局限性（如患者无法坚持合理的治疗方案等），                           SDS-PAGE凝胶、聚偏氟乙烯膜、组织固定液、RIPA裂解
                                       [3]
          使得患者的治疗和预后受到影响 ，因此有必要寻找新                            液、苏木精染液、伊红染液、油红 O 染液（批号分别为
          的治疗方法。                                              G2081-15、G2028-15、G2026-200T、G2175-50T、G6044-
              膈下逐瘀汤出自清代王清任的《医林改错》，具有活                         0.45、G1101、G2002、G1004、G1001、G1015）均购自武汉
          血化瘀、破癥消结的功效，主要用于治疗肝炎、糖尿病和                           赛维尔生物科技有限公司；兔源沉默信息调节因子1（si‐
          不孕症等。方中，当归、川芎、赤芍养血活血，桃仁、红                           lence information regulator 1，SIRT1）多克隆抗体（批号
          花、五灵脂破血逐瘀，配香附、乌药、枳壳、延胡索、牡丹                          13161-1-A）购自美国 Proteintech 公司；鼠源核转录因子
          皮行气止痛，辅甘草调和诸药，是中医活血化瘀的经典                            红系 2 相关因子 2（nuclear factor-erythroid 2-related fac‐
          方 。研究显示，膈下逐瘀汤具有抗肝纤维化的作用，可                           tor 2，Nrf2）单克隆抗体、鼠源谷胱甘肽过氧化物酶 4
            [4]
                                        [5]
          减轻四氯化碳所致的大鼠肝纤维化 。铁死亡是一种细                           （glutathione peroxidase 4，GPX4）单克隆抗体（批号分别
          胞程序性死亡的新形式，与其他典型的细胞死亡形式                             为 sc-365949、sc-166570）均购自美国 SantaCruz 公司；鼠
         （如凋亡、坏死、热解、自噬依赖性细胞死亡）相比，铁死                           源 β-肌动蛋白单克隆抗体和 Alexa Fluor  488 标记的山
                                                                                                ®
                                                  [6]
          亡具有不同的生物化学、形态学和遗传学特征 。越来                            羊抗鼠、山羊抗兔 IgG 二抗（批号分别为 ab170325、
          越多的证据表明，细胞铁死亡在 MAFLD 等慢性肝脏疾                         ab150113、ab150077）均购自英国Abcam公司；总胆固醇
                                     [7]
          病的病理过程中具有关键作用 。可见，抑制细胞铁死                           （total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、天冬
          亡可能成为未来治疗 MAFLD 的新策略。谷胱甘肽                           氨酸转氨酶（aspartate transaminase，AST）、丙氨酸转氨
         （glutathione，GSH）是铁死亡途径的调控因子之一，而研                    酶（alanine  transaminase，ALT）、丙 二 醛（malondialde‐
          究表明，膈下逐瘀汤可增强肝组织中GSH抗氧化系统的                           hyde，MDA）、活性氧（reactive oxygen species，ROS）、超
              [8]
          活性 ，提示该方可能影响 MAFLD 的铁死亡进程。为                         氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、GSH、组织
          验证这一假设，本研究基于网络药理学和斑马鱼实验从                            铁检测试剂盒（批号分别为A111-2-1、A110-1-1、C010-2-
          铁死亡角度探究了膈下逐瘀汤干预 MAFLD 的作用机                          1、C009-3-1、E004-1-1、A003-1-2、A001-3-2、A005-1-2、
          制，旨在为该病的临床治疗提供新思路。                                  A039-2-1）均购自南京建成生物工程研究所；硫代乙酰
          1 材料                                                胺（thioacetamide，TAA；批号 B65934）购自上海源叶生
          1.1 主要仪器                                            物科技有限公司；斑马鱼培养液（每 4 L 水含海盐 1.33
              本研究所用主要仪器有 Multiskan SkyHigh 型全波                g、碳酸氢钠 0.4 g、甲基蓝 1.5 mL）购自上海费曦生物科
          长酶标仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），DM3000         技有限公司。
          型光学显微镜、RM2235 型石蜡病理切片机（德国 Leica                     1.3 实验动物
          公司），WD-9423B型化学发光分析仪、DYCZ-2DN型电                         实验用斑马鱼为健康 AB 系野生型斑马鱼，雌雄各
          泳仪、WD-9405F型脱色摇床（北京六一生物科技有限公                        半，购自杭州环特生物科技股份有限公司[动物生产许
          司），ES600 型全自动包埋机（金华市华速科技有限公                         可证号 SCXK（浙）2022-0003]。所有斑马鱼均于 28 ℃
          司）等。                                                恒温、光（14 h）/暗（10 h）循环条件下适应性喂养 1 周。


          · 2978 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 24                            中国药房  2024年第35卷第24期
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