Page 22 - 《中国药房》2024年24期

次药液并及时移去死亡的幼鱼。培养72 h后，观察并统
RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正向调控
基因表达的正向调控
RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的负向调控 计斑马鱼幼鱼的存活情况，绘制致死曲线。
细胞凋亡过程的正向调控
细胞对缺氧的反应
对药物的反应 结果（图3）显示，随着药物暴露浓度的升高，斑马鱼
细胞凋亡过程的负向调控
基因表达的负向调控 幼鱼死亡逐渐增多，有一定的浓度依赖趋势；膈下逐瘀
老化
炎症应答
汤的最大非致死浓度为 100 μg/mL，但该剂量可导致幼
细胞核
细胞溶质
细胞质 鱼抽动；同时，笔者在实验中发现，该方的最大非致畸
核原形质
质膜 浓度为 80 μg/mL，故选取该浓度为高质量浓度，20、40
薄膜
染色质
线粒体 μg/mL为低、中质量浓度，进行后续实验。
高分子配合物
内质网膜
100
蛋白质结合
酶结合
RNA聚合酶Ⅱ核心启动子近端区序列特异性DNA结合
DNA结合
RNA聚合酶Ⅱ转录因子活性及序列特异性DNA结合
转录因子活性及序列特异性DNA结合 BP 死亡率/% 50
转录因子结合 CC
RNA聚合酶Ⅱ序列特异性DNA结合转录因子结合 MF
锌离子结合
蛋白质结构域特异性结合
0 20 40 60
富集基因占比/% 0
A. GO富集 0 100 200 300 400
药物质量浓度/（μg/mL）
胰岛素抵抗
HIF1信号通路 图3 不同质量浓度膈下逐瘀汤作用于斑马鱼幼鱼的致
脂肪细胞因子信号通路
铁死亡 死曲线
动脉粥样硬化 －lgP
乙型肝炎 12
非酒精性脂肪性肝病 10 2.2.3 分组、造模与给药
Th17细胞分化
卡波氏肉瘤疱疹病毒 8 取正常发育的 3 dpf 斑马鱼幼鱼，置于 6 孔板中，随
Chagas病 6
麻疹 机分为对照组（con组）、模型组（mod组）、异甘草酸镁组
AGE/RAGE信号通路 富集基因占比/%
肝细胞癌 10.0
志贺氏菌病 12.5 （阳性对照，5 mg/mL）和膈下逐瘀汤低、中、高质量浓度
胰腺癌 15.0
酒精性肝病 17.5 组（20、40、80 μg/mL）。con组加入斑马鱼培养液6 mL，
叉头框转录因子O信号通路
脂质和动脉粥样硬化 mod 组加入 TAA（终浓度为 5 mmol/L，以斑马鱼培养液
结肠直肠癌
癌症途径 为溶剂，下同）6 mL，各药物组加入 TAA 3 mL 和相应质
－5
－5
0 0.5×10 1.0×10 1.5×10 －5
B. KEGG通路富集 量浓度药液 3 mL。各组斑马鱼幼鱼均在 28 ℃恒温、光
图1 中心靶点的GO富集及KEGG通路富集分析 （14 h）/暗（10 h）循环条件下培养 72 h，每天更换培养液
结合能/（kJ/mol） 或药液。TAA浓度、异甘草酸镁质量浓度参考本课题组
TP53 －4 前期研究和相关文献确定 [8，12] 。
HIF1A －5 2.2.4 斑 马 鱼 幼 鱼 体 内 ALT、AST、TC、TG、MDA、
JUN
－6 SOD、GSH、ROS含量检测
STAT3
－7 按“2.2.3”项下方法分组（每组 20 条）、造模、给药。
SIRT1
－8 培养 72 h 后，取各组斑马鱼幼鱼，用预冷 PBS 清洗 3 次
IL-1β
－9 后，加入无水乙醇300 μL匀浆，按相应试剂盒说明书操
Nrf2
－10 作，以酶标仪检测其体内 ALT、AST、TC、TG、MDA、
ACSL4
槲皮素 山柰酚 β-谷甾醇 谷甾醇 豆甾醇 异鼠李素 木犀草素 罗痛定 黄芩素 柚皮素 SOD、GSH、ROS 含量。实验数据以 x±s 表示，采用
SPSS 25.0 软件进行统计分析，多组间比较采用单因素
图2 膈下逐瘀汤基于铁死亡改善MAFLD的潜在靶点 方差分析，进一步两两比较采用 SNK-q 检验（检验水准
和主要活性成分的分子对接热图 α＝0.05，统计方法下同）。
2.2.2 膈下逐瘀汤干预浓度的确定 结果（表 1）显示，与 con 组比较，mod 组斑马鱼幼鱼
取斑马鱼胚胎，待其发育。取发育正常的受精后 3 体内 ALT、AST、TC、TG、MDA、ROS 含量均显著升高，
d（3 days post fertilization，3 dpf）的斑马鱼幼鱼，置于6孔 SOD、GSH 含量均显著降低（P＜0.05）；与 mod 组比较，
板中，随机分为不同质量浓度药物组（每个质量浓度 30 各药物组斑马鱼幼鱼体内 ALT、AST、TC、TG、MDA、
条），吸弃培养液，每孔加入 0～400 μg/mL 的膈下逐瘀 ROS 含 量 均 显 著 降 低 ，SOD、GSH 含 量 均 显 著 升 高
汤药液 6 mL，于 28.5 ℃培养箱中培养，每隔 24 h 更换 1 （P＜0.05）。

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