Page 23 - 《中国药房》2024年24期

表1 膈下逐瘀汤对MAFLD模型斑马鱼幼鱼生化指标的影响（x±s，n＝20）
组别 ALT/（U/L） AST/（U/L） TC/（μmol/mg） TG/（mmol/mg） MDA/（mmol/mg） SOD/（U/mg） GSH/（μmol/mg） ROS
con组 65.256±6.378 3.200±0.392 2.247±0.060 0.052±0.002 0.392±0.019 26.309±0.601 23.505±1.301 3.343±0.054
mod组 137.594±7.189 a 7.653±0.316 a 2.941±0.090 a 0.083±0.001 a 0.860±0.032 a 12.882±0.631 a 15.500±0.714 a 6.746±0.214 a
异甘草酸镁组 81.671±2.044 b 3.814±0.262 b 2.399±0.029 b 0.065±0.004 b 0.576±0.024 b 22.677±0.910 b 21.436±0.740 b 4.774±0.434 b
膈下逐瘀汤低质量浓度组 108.548±6.418 b 6.588±0.167 b 2.757±0.046 b 0.074±0.004 b 0.745±0.037 b 14.477±0.451 b 17.793±1.156 b 6.093±0.157 b
膈下逐瘀汤中质量浓度组 91.228±6.942 b 5.950±0.388 b 2.477±0.109 b 0.067±0.003 b 0.689±0.030 b 17.213±0.632 b 16.935±0.553 b 4.276±0.124 b
膈下逐瘀汤高质量浓度组 90.534±2.554 b 5.835±0.514 b 2.302±0.070 b 0.057±0.007 b 0.666±0.031 b 21.417±2.174 b 20.091±0.358 b 5.247±0.067 b
a：与con组比较，P＜0.05；b：与mod组比较，P＜0.05。
2.2.5 斑马鱼幼鱼体内铁离子含量检测
按“2.2.3”项下方法分组（每组 10 条）、造模、给药。
培养 72 h 后，取各组斑马鱼幼鱼，用预冷 PBS 清洗 3 次
后，加入无水乙醇300 μL匀浆。按照相应试剂盒说明书
和相关文献 操作，以酶标仪检测其体内铁离子（Fe ） 100 100 μμmm 100
[13]
2+
100 μμmm
100 μμmm
100
含量。 A. con组 B. mod组 C.异甘草酸镁组
结 果 显 示 ，con 组 斑 马 鱼 幼 鱼 体 内 Fe 含 量 为
2+
（12.43±0.88）mg/g；与con组比较，mod组斑马鱼幼鱼体
2+
内 Fe 含量[（18.49±0.56）mg/g]显著升高（P＜0.05）；与
mod组比较，异甘草酸镁组和膈下逐瘀汤低、中、高质量
2+
浓 度 组 斑 马 鱼 幼 鱼 体 内 Fe 含 量 [（13.55±1.12）、 100 μμmm 100 μμmm 100 μμmm
100
100
100
（16.81±0.46）、（16.48±0.39）、（15.37±0.90）mg/g]均显 D.膈下逐瘀汤 E.膈下逐瘀汤 F.膈下逐瘀汤
低质量浓度组 中质量浓度组 高质量浓度组
著降低（P＜0.05）。
箭头：肝组织细胞结构损伤区域。
2.2.6 斑马鱼幼鱼肝组织病理学观察 图4 膈下逐瘀汤对MAFLD模型斑马鱼幼鱼肝组织细
按“2.2.3”项下方法分组（每组 20 条）、造模、给药。 胞结构影响的显微图（HE染色）
培养 72 h 后，取各组斑马鱼幼鱼（每组 10 条），以 4% 组
织固定液固定24 h，脱水后于65 ℃下进行石蜡包埋、切
片，再使用苏木精、伊红染液染色10 min，使用显微镜观
察其肝组织细胞结构。另取各组斑马鱼幼鱼（每组剩余
10 条），在 4 ℃下以 4% 组织固定液固定过夜，用 PBS 洗 100 μμmm 100 μμmm 100 μμmm
100
100
100
涤3次，依次于室温下在25%、50%、75%、100%的1，2-丙 A. con组 B. mod组 C.异甘草酸镁组
二醇溶液中有序浸泡20 min，再于室温下以0.5%油红O
染液染色12 h，用显微镜观察其肝脏脂肪变性情况。
苏木精-伊红（HE）染色结果（图4）显示，con组斑马
鱼幼鱼肝组织细胞大小均一、形状规则、排列整齐，细胞 100 μμmm 100 100 μμmm
100
100 μμmm
100
F.膈下逐瘀汤
核基本分布于细胞中心；细胞膜光滑，细胞器结构清晰， D.膈下逐瘀汤 E.膈下逐瘀汤 高质量浓度组
低质量浓度组
中质量浓度组
均匀分布在细胞质内。mod 组斑马鱼幼鱼肝组织可见 箭头：肝脏脂质蓄积区域。
少量空泡，细胞质疏松。各药物组斑马鱼幼鱼的肝组织 图5 膈下逐瘀汤对MAFLD模型斑马鱼幼鱼肝脏脂肪
病理损伤较mod组均有所改善，但仍不及con组。 变性影响的显微图（油红O染色）
油红 O 染色结果（图 5）显示，与 con 组比较，mod 组
适量，进行 10%SDS-PAGE 分离并转移到聚偏氟乙烯膜
斑马鱼幼鱼可见明显的肝脏肿大，肝组织染色呈深红
上，以5%脱脂奶粉于室温下封闭2 h；加入SIRT1、Nrf2、
色、轮廓不清晰，肝脏脂质蓄积严重；各药物组斑马鱼幼
GPX4、β-肌动蛋白一抗（稀释比例分别为 1∶1 000、
鱼肝组织颜色深于 con 组但浅于 mod 组，提示其肝脏脂
1∶1 000、1∶1 000、1∶2 000），于 4 ℃下孵育过夜；加入相
质蓄积均较mod组有所减轻，但仍不及con组。
2.2.7 斑马鱼幼鱼体内 SIRT1、Nrf2、GPX4 蛋白表达 应二抗（稀释比例均为 1∶5 000），于室温下孵育 1 h 后，
检测 以化学发光试剂盒显色后成像。使用Image J软件对各
按“2.2.3”项下方法分组（每组 30 条）、造模、给药。 蛋白条带灰度值进行分析，以 β-肌动蛋白为内参，计算
培养 72 h 后，取各组斑马鱼幼鱼，使用含蛋白酶抑制剂 各目的蛋白的表达水平。
的 RIPA 裂解液于冰上裂解、离心后收集上清液，使用 结果（图6、表2）显示，与con组比较，mod组斑马鱼
BCA 试剂盒检测蛋白浓度并作变性处理。取变性蛋白 幼鱼体内 SIRT1、Nrf2、GPX4 蛋白的表达均显著下调

中国药房 2024年第35卷第24期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 24 · 2981 ·