Page 24 - 《中国药房》2024年24期

（P＜0.05）；与mod组比较，各药物组斑马鱼幼鱼体内上 本研究选择TAA诱导的斑马鱼幼鱼MAFLD模型，从铁
述蛋白的表达均显著上调（P＜0.05）。 死亡角度初步验证膈下逐瘀汤对MAFLD的干预机制。
选自《医林改错》的膈下逐瘀汤可养血调肝、化瘀行
SIRT1 110 kDa
[16]
滞，具有调节炎症因子和止痛等作用 。本研究结果显
Nrf2 61 kDa
示，膈下逐瘀汤可降低 MAFLD 模型斑马鱼幼鱼体内
GPX4 21 kDa
ALT、AST含量，减轻其肝损伤程度；可改善斑马鱼幼鱼
β-肌动蛋白 42 kDa 肝脏脂肪变性和脂质蓄积，并可降低TC、TG含量；可降
2+
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ 低MDA、ROS、Fe 含量，提高SOD、GSH含量，可见该方
Ⅰ：con组；Ⅱ：mod组；Ⅲ：异甘草酸镁组；Ⅳ：膈下逐瘀汤低质量浓
可调节 MAFLD 模型斑马鱼幼鱼的脂质代谢，改善氧化
度组；Ⅴ：膈下逐瘀汤中质量浓度组；Ⅵ：膈下逐瘀汤高质量浓度组。 应激水平，维持其体内Fe 稳态。
2+
图6 膈下逐瘀汤对MAFLD模型斑马鱼幼鱼体内相关
Nrf2是氧化应激相关基因表达的重要调节因子，可
蛋白表达影响的电泳图
调节铁死亡调控因子GSH的表达，Nrf2信号通路的激活
表2 膈下逐瘀汤对MAFLD模型斑马鱼幼鱼体内相关
[17]
可使肝组织中GSH抗氧化活性增强 。可见，Nrf2可能
蛋白表达的影响（x±s，n＝30）
是 MAFLD 的潜在治疗靶点。SIRT1 可使 Nrf2 去乙酰
组别 SIRT1/β-肌动蛋白 Nrf2/β-肌动蛋白 GPX4/β-肌动蛋白 化，并防止其泛素化，从而促进 Nrf2 在细胞核中的积累
con组 0.57±0.03 0.40±0.08 0.81±0.16
mod组 0.25±0.01 a 0.14±0.02 a 0.21±0.04 a 并增强其转录活性，故而靶向SIRT1可通过减少氧化应
[18]
异甘草酸镁组 0.47±0.13 b 0.26±0.04 b 0.82±0.23 b 激和促进组织再生来减轻肝组织损伤 。GPX4在铁死
膈下逐瘀汤低质量浓度组 0.48±0.02 b 0.46±0.11 b 0.78±0.10 b 亡过程中具有重要的调节作用，可将脂质过氧化氢转化
膈下逐瘀汤中质量浓度组 0.78±0.06 b 0.42±0.01 b 0.75±0.05 b
膈下逐瘀汤高质量浓度组 0.79±0.04 b 0.52±0.14 b 0.92±0.27 b 为无毒的脂醇，从而阻断脂质过氧化的发生；同时，
[19]
a：与con组比较，P＜0.05；b：与mod组比较，P＜0.05。 GPX4可调控转换由铁积累所产生的磷脂过氧化 。如
3 讨论 果铁死亡过程的任一环节受到破坏，GPX4 的活性就会
降低，从而导致过氧化物在细胞内积累，最终诱发铁死
在临床应用中，相较于靶点单一、毒副作用大、疗效
亡 。本研究结果显示，与con组比较，mod组斑马鱼幼
[20]
差的化学药物，中药多组分、多途径、多靶点协同作用的
鱼体内SIRT1、Nrf2、GPX4蛋白的表达均显著下调，而膈
优势日益凸显。本研究借助网络药理学分析方法和分
下逐瘀汤可改善这一情况。与异甘草酸镁相同，膈下逐
子对接手段，挖掘膈下逐瘀汤作用于 MAFLD 铁死亡的
瘀汤可上调斑马鱼幼鱼体内 SIRT1 蛋白的表达，提高
潜在靶点及信号通路：首先，本研究通过检索TCMSP数
Nrf2 的转录活性，进一步激活 Nrf2 信号通路，促使肝脏
据库和中国知网共获取膈下逐瘀汤的潜在活性成分277
中 GPX4 的生物合成和 GSH 的含量增加，从而抑制
个，并检索得到相应靶点1 030个；进一步根据预测结果
MAFLD的铁死亡进程。
构建“药物-成分-靶点”网络，得到该方主要活性成分，即
综上所述，本研究通过网络药理学分析和斑马鱼实
槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、谷甾醇、豆甾醇、异鼠李素、
验相结合的方法，基于铁死亡探究了膈下逐瘀汤干预
罗痛定、木犀草素、黄芩素、柚皮素；然后，本研究将所得
MAFLD的多成分-多靶点-多通路的潜在机制，并通过斑
膈下逐瘀汤潜在活性成分对应靶点、MAFLD 相关靶点
马鱼幼鱼模型证实了该方可能通过激活 SIRT1/Nrf2/
和铁死亡相关靶点取交集并构建交集靶点 PPI 网络，确
GPX4 轴来抑制铁死亡，从而改善 MAFLD 模型斑马鱼
定了该方作用于 MAFLD 铁死亡的中心靶点，即 TP53、
幼鱼肝组织的一系列病理变化，为临床治疗 MAFLD 和
JUN、HIF1A、STAT3、SIRT1、IL-1β、Nrf2、ACSL4；最后，
未来开发安全稳定地治疗MAFLD的相关药物提供了基
本研究继续对交集靶点进行GO富集和KEGG通路富集
础和新的思路。
分析，并通过分子对接验证了主要活性成分和中心靶点
参考文献
的结合情况。上述结果提示，膈下逐瘀汤对 MAFLD 的
[ 1 ] CANIVET C M，BOURSIER J，LOOMBA R. New no‐
干预作用可能是通过铁死亡相关通路来实现的。根据
menclature for nonalcoholic fatty liver disease：under‐
上述结果和既往研究 [8，11] ，本研究选择了 SIRT1/Nrf2/
standing metabolic dysfunction-associated steatotic liver
GPX4轴，作为后续动物验证实验的切入点。
disease，metabolic dysfunction- and alcohol-associated
斑马鱼是常被用于发育和药物研究的优秀模型动
liver disease，and their implications in clinical practice[J].
物，具有成本低、发育快等优点，其胚胎及幼鱼的光学透
Semin Liver Dis，2024，44（1）：35-42.
[14]
明度有助于器官发育和生物过程的无创观察 。研究 [ 2 ] CASTILLO-NÚÑEZ Y， ALMEDA-VALDES P，
指出，与大部分哺乳动物一样，斑马鱼也会出现脂肪变 GONZÁLEZ-GÁLVEZ G，et al. Metabolic dysfunction-
性，可逐渐演变为 MAFLD，并最终进展为肝细胞癌，可 associated steatotic liver disease and atherosclerosis[J].
[15]
用于 MAFLD 的病理研究和药物干预评估 。基于此， Curr Diab Rep，2024，24（7）：158-166.
· 2982 · China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 24 中国药房 2024年第35卷第24期