Page 24 - 《中国药房》2024年21期
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准曲线，计算回归方程。结果显示，各成分在进样质量                            结果显示，竹沥半夏中次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷的
          浓度范围内均与其峰面积线性关系良好（R ＞0.999 0），                      平 均 含 量 较 姜 半 夏 分 别 下 降 了 15.90%、12.00%、
                                               2
          详见表2。                                               26.04%、22.18%，其中次黄嘌呤、腺嘌呤、鸟苷含量差异
               表2 4种核苷类成分的回归方程及线性范围                           具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。结果见表3。
           待测成分     回归方程                R 2    线性范围/（µg/mL）   表3 10批姜半夏和竹沥半夏中4种核苷类成分含量测
           次黄嘌呤     Y＝31 445X+544.39   0.999 8  0.514～8.224        定结果（n＝3，µg/g）
           尿苷       Y＝24 888X+2 723.30  0.999 6  1.000～16.000
           腺嘌呤      Y＝50 768X－26 087   0.999 4  1.500～24.000  编号    次黄嘌呤  尿苷  腺嘌呤  鸟苷  编号  次黄嘌呤  尿苷  腺嘌呤  鸟苷
           鸟苷       Y＝19 599X－4 250.20  0.999 5  1.210～19.360  J1   31.21  27.28  40.45  28.16  Z1  23.70  20.63  27.75  24.74
                                                              J2    18.31  15.81  24.47  20.04  Z2  13.68  9.48  14.11  13.46
          2.6.3 精密度试验                                         J3    16.33  10.71  20.25  19.61  Z3  13.18  7.88  13.68  12.47
              精密吸取“2.6.2”项下混合对照品溶液（次黄嘌呤、                      J4    23.96  31.77  23.05  28.29  Z4  23.60  32.07  17.39  21.23
          尿苷、腺嘌呤、鸟苷的质量浓度分别为 2.056、4.000、                      J5    20.67  64.90  97.11  66.89  Z5  14.07  17.53  35.57  32.97
                                                              J6    20.19  24.40  35.36  32.07  Z6  16.54  30.68  27.21  27.68
          6.000、4.840 μg/mL）10 μL，按“2.3”项下色谱条件连续              J7    16.34  18.44  51.79  43.64  Z7  18.84  47.04  62.40  50.66
          进样测定6次，记录各成分的峰面积。结果显示，次黄嘌                           J8    15.69  19.69  59.46  55.67  Z8  11.60  16.78  50.53  39.12
          呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷峰面积的 RSD 分别为 0.19%、                      J9    15.51  81.26  92.42  119.43  Z9  13.16  77.50  78.47  98.56
                                                              J10   24.97  45.72  81.72  47.41  Z10  22.49  39.57  61.97  38.04
          0.19%、0.32%、0.25%（n＝6），表明仪器精密度良好。
                                                              平均值   20.32  34.00  52.61  46.12  平均值  17.09 a  29.92  38.91 b  35.89 b
          2.6.4 稳定性试验
                                                                 a：与姜半夏平均值比较，P＜0.01；b：与姜半夏平均值比较，P＜0.05。
              取“2.2.2”项下竹沥半夏供试品溶液（Z1），分别于室                    3 讨论
          温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.3”项下色谱条件进样测
                                                              3.1 提取方法与色谱条件的考察
          定，记录峰面积。结果显示，次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷
                                                                  本研究对样品的提取条件进行了考察：比较了超纯
          峰面积的 RSD 分别为 0.63%、1.19%、0.41%、0.56%（n＝
                                                              水、15%甲醇、30%甲醇、50%甲醇、15%乙醇、30%乙醇、
          6），表明该供试品溶液在室温放置24 h内稳定性良好。
                                                              50% 乙醇作为提取溶剂的提取效果，结果表明，以 15%
          2.6.5 重复性试验
                                                              甲醇作为提取溶剂时各色谱峰的分离效果较好且响应
              取竹沥半夏样品（Z1）粉末（过四号筛）6 份，精密称
                                                              值高；比较了超声、加热回流提取2种提取方法的提取效
          定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下色
                                                              果，发现超声提取方式效果较好；比较了超声提取 30、
          谱条件进样测定，记录峰面积，并根据标准曲线计算各
                                                              45、60 min 的提取效果，发现超声提取 60 min 的竹沥半
          成分含量。结果显示，次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷的
                                                              夏样品色谱峰的分离度较高、峰形对称，能够满足分析
          平均含量分别为 23.59、20.40、27.63、24.88 µg/g，RSD 分
                                                              要求；比较了甲醇-水、甲醇-0.5%磷酸溶液、乙腈-水等流
          别为 0.65%、1.09%、0.60%、0.81%（n＝6），表明该方法重
                                                              动相的分离效果，结果发现，当有机相为甲醇时，色谱峰
          复性良好。
                                                              分离效果优于乙腈；流动相为甲醇-水时可达到较好的
          2.6.6 加样回收率试验
                                                              洗脱效果。经查阅文献          [14―15] ，并结合全波长扫描结果发
              取已知成分含量的竹沥半夏样品（Z1）约 1 g，共 6
                                                              现，姜半夏、竹沥半夏样品在260 nm波长处色谱峰信息
          份，按照对照品加入量和样品中含量约1∶1的比例，分别
          精密加入次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷对照品，按                             较丰富，且次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷的吸收较强，故
         “2.2.2”项下方法制备供试品溶液，然后按“2.3”项下色谱                      本研究选择260 nm作为检测波长。
          条件进样测定，记录各成分峰面积并计算其加样回收                             3.2 指纹图谱及化学计量学分析
          率。结果显示，次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、鸟苷的平均加                               本研究基于指纹图谱标定了姜半夏及其炮制品竹
          样回收率分别为 102.30%、99.01%、99.51%、101.42%，              沥半夏 10 个共有峰，10 批姜半夏和 10 批竹沥半夏各自
          RSD分别为1.08%、0.47%、0.21%、0.86%（n＝6），表明该              的相似度均大于0.850，表明2种样品各批次间质量差异
          方法准确度较好。                                            较小，整体质量相对稳定。化学计量学分析结果显示，
          2.6.7 样品含量测定                                        姜半夏与竹沥半夏能有效区分开，说明姜半夏在用竹沥
              精密称取姜半夏、竹沥半夏粉末各 10 批，按“2.2.2”                   炮制过程中成分发生了显著变化。根据VIP值＞1筛选
          项下方法制备供试品溶液，然后按“2.3”项下色谱条件进                         得到了腺嘌呤及峰1、8、10对应的4种差异性成分，后续
          样分析，通过标准曲线计算各样品中4种核苷类成分的                            可将腺嘌呤作为竹沥半夏的质控指标。本课题组未来
          含量。每个样品平行测 3 次，取平均值。将 10 批姜半                        也将结合质谱技术对竹沥半夏与姜半夏中成分进行定
          夏、竹沥半夏中 4 种核苷类成分的含量导入 GraphPad                      性分析，并对峰1、8、10对应的化学成分作进一步研究。
          Prism 8.0.2 软件进行统计分析，采用 Wilcoxon 检验对 2              3.3 核苷类成分选择及含量分析
          种样品中鸟苷含量进行分析，采用t检验对2种样品中次                               核苷类成分是姜半夏及其炮制品的共有药效成分
          黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤含量进行分析，检验水准α＝0.05。                        且为姜半夏止咳化痰的主要药效物质之一                  [10―11] 。因此，


          · 2594 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 21                            中国药房  2024年第35卷第21期
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