Page 22 - 《中国药房》2024年21期

95%A→85%A；15～20 min，85%A；20～25 min，85%A→ 170 5 6 7 8
160 1 2 3 4 9 10 R（姜半夏）
90%A；25～27 min，90%A→98%A；27～30 min，98%A）； 150 J10
140
130
流速为 1 mL/min；检测波长为 260 nm；柱温为 30 ℃；进 120 J9
110 J8
样量为10 µL。 100 J7
90
2.4 姜半夏和竹沥半夏指纹图谱的建立及分析 U/mV 80 J6
70
60 J5
2.4.1 精密度试验 50 J4
40 J3
取 Z1 样品的供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件连 30
20 J2
续进样测定 6 次，记录色谱图。以 6 号峰（腺嘌呤）为参 10 0 J1
照峰，计算得各共有峰相对保留时间的RSD为0.16%～ 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
t/min
0.28%（n＝6）、相对峰面积的RSD为0.18%～0.21%（n＝ A.姜半夏
6），表明方法精密度良好。 6 8
160 1 2 3 4 5 7 9 10
2.4.2 稳定性试验 150 R（竹沥半夏）
140 Z10
取 Z1 样品的供试品溶液，分别于室温下放置 0、2、 130 Z9
120
4、8、12、24 h 时按“2.3”项下色谱条件进样检测，记录色 110 Z8
100 Z7
谱图。以6号峰（腺嘌呤）为参照峰，计算得各共有峰相 U/mV 90 Z6
80
对保留时间的 RSD 为 0.38%～0.65%（n＝6）、相对峰面 70 Z5
60
50 Z4
积的 RSD 为 0.49%～1.30%（n＝6），表明该供试品溶液 40 Z3
30
在室温放置24 h内稳定性较好。 20 Z2
10
0 Z1
2.4.3 重复性试验
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
取Z1样品粉末适量，按“2.2.2”项下方法平行制备6 t/min
B.竹沥半夏
份供试品溶液，再按“2.3”项下色谱条件进样检测，记录
图1 10 批姜半夏、竹沥半夏样品的 HPLC 指纹图谱及
色谱图。以6号峰（腺嘌呤）为参照峰，计算得各共有峰
对照指纹图谱R
相对保留时间的 RSD 为 0.54%～0.94%（n＝6）、相对峰
面积的 RSD 为 1.14%～1.73%（n＝6），表明该方法重复 6
100
性良好。
5 7
2.4.4 指纹图谱的建立及共有峰的指认 80 3
取不同批次姜半夏（J1～J10）和竹沥半夏（Z1～ 60
Z10）粉末分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液。取 U/mV
40 6 8 混合对照品溶液
上述各样品溶液及“2.2.1”项下混合对照品溶液，分别按 3 5 7
1 2 4 9 10 R（竹沥半夏）
“2.3”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。将各样品的 20 5 6 7 8
1 2 3 4 9 10 R（姜半夏）
色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
版）》，分别以J9和Z9样品的图谱为参照图谱，设置时间 t/min
窗宽度为 0.1 min，经多点校正后，进行 Mark 峰匹配，分 3：次黄嘌呤；5：尿苷；6：腺嘌呤；7：鸟苷。
别生成姜半夏和竹沥半夏的HPLC指纹图谱，并采用中 图2 混合对照品溶液与竹沥半夏、姜半夏对照指纹图
位数法分别生成姜半夏和竹沥半夏的对照指纹图谱R， 谱R的叠加图
详见图1。结果显示，姜半夏、竹沥半夏指纹图谱共匹配
2.5 姜半夏和竹沥半夏指数图谱的化学计量学分析
出 10 个共有峰。通过将姜半夏和竹沥半夏的对照指纹
图谱 R 分别与混合对照品溶液图谱（图 2）比对，共指认 2.5.1 系统聚类分析
出4个共有峰，分别为次黄嘌呤（3号峰）、尿苷（5号峰）、 以姜半夏和竹沥半夏指纹图谱中的 10 个共有峰峰
腺嘌呤（6号峰）、鸟苷（7号峰）。 面积为变量，将其导入多元统计分析软件 SIMCA 14.1
2.4.5 相似度评价 中，经标准化处理后，采用组间 Ward 法，以欧氏距离平
以姜半夏和竹沥半夏的对照指纹图谱R为参照，采
方和为测度，进行系统聚类分析（hierarchical cluster
用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 版）》进行
analysis，HCA）。结果显示，20 批样品被聚为 2 类：姜半
相似度分析。结果显示，10批姜半夏图谱与其对照指纹
夏（J1～J10）聚为一类，竹沥半夏（Z1～Z10）聚为另一
图谱 R 的相似度为 0.851～0.980，10 批竹沥半夏图谱与
其对照指纹图谱 R 的相似度为 0.874～0.990，均大于 类。结果表明，所选特征峰可有效区分姜半夏和竹沥半
0.850，表明本研究所建指纹图谱可用于姜半夏和竹沥半 夏，姜半夏和竹沥半夏化学成分存在差异，可以采用
夏的整体质量控制。 HCA法进行识别并分类。结果见图3。

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