Page 99 - 《中国药房》2024年3期

1、0.5、0.25、0.1 μg/mL的混合标准曲线样品。混合步骤 100 1.60 100 1.60
同标准曲线样品，配制成 ETP 质量浓度为 160、10、0.5
μg/mL，IPM、MEM质量浓度分别均为80、5、0.25 μg/mL
的高、中、低浓度的混合质控血浆样品溶液。 相对丰度/% 50 相对丰度/% 50
2.3 血浆样品预处理
精密吸取 100 μL 血浆样品，与稳定剂 1∶1 混合，加
0 0
入 10 μL 混合内标溶液（ETP-D4 为 25 μg/mL，IPM-D4 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4
t/min t/min
为 100 μg/mL，MEM-D6 为 25 μg/mL），涡旋 15 s；加入 A1.空白血浆+ETP标准品 B1.空白血浆+ETP-D4标准品
400 μL甲醇，涡旋30 s，以13 000 r/min离心10 min；取上 100 0.62 100 0.72
清液，用0.22 μm微孔滤膜过滤，取滤液100 μL，加超纯
水300 μL，涡旋10 s，以13 000 r/min离心10 min后取上
清液，进样。 相对丰度/% 50 相对丰度/% 50
2.4 方法学验证
0.49 0.56
2.4.1 专属性
分别取健康者的空白血浆加入中浓度的混合质控 0 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 0 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4
样品溶液和混合内标溶液，均按“2.3”项下方法处理，记 t/min t/min
A2.空白血浆+IPM标准品 B2.空白血浆+IPM-D4标准品
录色谱图。结果显示，ETP、IPM、MEM与对应内标色谱
100 1.30 100 1.30
峰峰形良好，完全分离。ETP 和 ETP-D4 保留时间均为
1.60 min；MEM和MEM-D6保留时间均为1.30 min；IPM
和IPM-D4以双峰存在，其中IPM双峰保留时间为0.49、 相对丰度/% 50 相对丰度/% 50
0.62 min，IPM-D4 双峰保留时间为 0.56、0.72 min。人血
浆中内源性物质不干扰药物和对应内标的测定，该方法
专属性良好。结果见图1（空白血浆图略）。 0 0
0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4
2.4.2 标准曲线与定量下限 t/min t/min
A3.空白血浆+MEM标准品 B3.空白血浆+MEM-D6标准品
取ETP、IPM、MEM混合标准曲线样品，每一质量浓
图1 ETP、IPM、MEM及其内标的MRM图谱
度各 3 份，按“2.3”项下方法处理，记录峰面积。分别以
对照品质量浓度为横坐标（X），3种药物与其内标的峰面 IPM、MEM分别均为2.5 μg/mL）、中（ETP为100 μg/mL，
2
积比值为纵坐标（Y），采用 W＝1/X 进行线性回归运算， IPM、MEM分别均为50 μg/mL）、高（ETP为1 600 μg/mL，
得 到 ETP、IPM、MEM 在 0.2～200、0.1～100、0.1～100 IPM、MEM分别均为800 μg/mL）3种质量浓度的混合质
μg/mL范围内线性良好，线性方程分别为Y＝2.877 67X－ 控样品溶液10 μL，与190 μL稳定剂、400 μL甲醇混匀，
2
2
0.082 915（r ＝0.997）、Y＝4.195 77X－0.167 327（r ＝ 以超纯水适当稀释后上样检测，对照品和内标峰面积比
2
0.993）、Y＝6.256 62X－0.074 893 （r ＝0.994）。以最低 值记为 C。提取回收率（%）＝A/B×100%，基质效应
浓度为定量下限（lower limit of quantification，LLOQ）。 （%）＝B/C×100%。结果显示，ETP、IPM、MEM 低、中、
取 6 份 ETP、IPM、MEM 质量浓度为 0.2、0.1、0.1 μg/mL 高3种质量浓度混合质控样品内标归一化的提取回收率
的混合标准曲线样品，按照“2.3”项下方法处理后记 及基质效应较一致，全部RSD≤12.99%，详见表2。
录 实 测 浓 度 。 实 测 浓 度 的 相 对 误 差（relative error， 表2 ETP、IPM、MEM 混合质控样品内标归一化的提
RE）＜3.60%，相对标准偏差（relative standard deviation， 取回收率及基质效应（n＝6）
RSD）＜9.41%。 提取回收率/% 基质效应/%
药物 理论质量浓度/（μg/mL）
2.4.3 提取回收率与基质效应 x±s RSD x±s RSD
取不同来源空白血浆配制低（ETP 为 0.5 μg/mL， ETP 0.5 99.03±7.72 7.79 92.30±6.67 7.23
10 97.53±5.77 5.92 95.10±6.06 6.38
IPM、MEM分别均为0.25 μg/mL）、中（ETP为10 μg/mL，
160 95.14±3.80 3.99 98.02±4.33 4.42
IPM、MEM 分别均为 5 μg/mL）、高（ETP 为 160 μg/mL， IPM 0.25 107.08±7.81 7.29 91.65±8.69 9.48
IPM、MEM 分别均为 80 μg/mL）3 种质量浓度的质控样 5 96.46±7.59 7.87 101.55±8.15 8.03
80 94.62±6.13 6.48 98.46±12.79 12.99
品，按“2.3”项下方法处理，每个质量浓度平行制备6份，
MEM 0.25 102.82±4.37 4.25 83.77±3.39 4.04
将对照品与内标峰面积的比值记为A。取6份不同来源 5 102.38±3.04 2.96 90.41±5.75 6.36
的空白血浆按“2.3”项下方法处理后，加入高、中、低3种 80 97.85±4.32 4.42 94.89±5.70 6.01
质量浓度混合质控样品溶液和混合内标溶液，对照品和 2.4.4 精密度和准确度
内标峰面积比值记为 B。取 6 份低（ETP 为 5 μg/mL， 配制 ETP 质量浓度分别为 0.2、0.5、10、160 μg/mL，

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