Page 98 - 《中国药房》2024年3期

目前，我国临床用碳青霉烯类抗生素主要为亚胺培 1.60 min，85%A→65%A；1.60～1.70 min，65%A→95%A；
南（imipenem，IPM）、美罗培南（meropenem，MEM）、厄 1.70～3.50 min，95%A）；流速为 0.3 mL/min；进样量为 8
他培南（ertapenem，ETP），通常为单一用药。然而有研 μL；柱温为40 ℃；进样器为8 ℃。离子源为电喷雾离子
究表明，双碳青霉烯联合疗法（ETP 联合 MEM）可以增 源 ，采 用 多 反 应 监 测（multiple reaction monitoring，
强碳青霉烯类药物对耐药肠杆菌/肺炎克雷伯菌的抗菌 MRM）方式，检测模式为正离子模式。ETP、IPM、MEM
作用，用于多黏菌素类抗生素导致肾功能受损的重症感 及其内标的质谱检测参数见表1。
染患者 [8―9] 。由于临床用药方案的改进及血浆中碳青霉 表1 ETP、IPM、MEM及其内标的质谱检测参数
[10]
烯类抗生素的不稳定性 ，故需满足临床上重症患者不 项目 母离子m/z 子离子m/z 锥孔电压/V 碰撞电压/V 保留时间/min
同碳青霉烯类抗生素血药浓度定量需求，即定量方法应 ETP定量 476.02 68.02 28 28 1.60
达到同时快速定量多种药物血药浓度的要求。超高效 ETP定性 476.02 113.97 28 18 1.60
ETP-D4 480.20 68.02 18 44 1.60
液 相 色 谱 - 质 谱 联 用（ultra-high performance liquid IPM定量 300.02 97.92 30 30 0.49，0.62
chromatography-mass spectrometry，UPLC-MS/MS）法灵 IPM定性 300.02 141.99 30 30 0.49，0.62
敏度和特异度高，操作简单快速，适用于多种药物监测。 IPM-D4 304.14 107.01 44 16 0.56，0.72
MEM定量 384.01 68.02 30 30 1.30
本研究建立了一种简单快速测定3种常用碳青霉烯类抗
MEM定性 384.01 140.89 30 17 1.30
生素（ETP、IPM、MEM）血药浓度的UPLC-MS/MS法，用 MEM-D6 390.20 68.02 30 30 1.30
于监测重症患者的血药浓度，以期为患者个体化给药提
2.2 相关溶液与血浆样品的配制
供参考。
2.2.1 稳定剂配制
1 材料
精密称取 MOPS 缓冲剂 10.46 g，置于 250 mL 容量
1.1 主要仪器
瓶中，加纯水溶解并定容，得0.2 mol/L MOPS缓冲液，用
Waters ACQUITY UPLC Ⅰ-Class 系统、Xevo TQD
1 mol/L NaOH 调节 pH 至 6.8，即得稳定剂，置于 4 ℃冰
系统、Masslynx V4.2 工作站均购自美国 Waters 公司；
箱冷藏备用。
MX-F 型固定式涡旋混合仪购自美国 Scilogex 公司； 2.2.2 ETP、IPM、MEM标准品溶液配制
BY-G20 型高速离心机购自北京白洋医疗器械有限公 精密称取 ETP、IPM、MEM 各 1.00 mg，分别置于 EP
司；SB-5200DT型超声波清洗机购自宁波新芝生物科技 管中，加“2.2.1”项下稳定剂 250 μL 溶解，配制成质量浓
有限公司。 度均为 4 000 μg/mL 的标准品储备液。将上述适量
1.2 主要药品与试剂 ETP、IPM、MEM 储备液以 2∶1∶1 比例混匀，得质量浓度
ETP（纯度98.16%，批号V-806800-NU1）、IPM（纯度 分别为 2 000、1 000、1 000 μg/mL 的混合标准品溶液。
98.14%，批号V-804800-NU1）、MEM（纯度86.80%，批号 取混合标准品溶液，用稳定剂倍比稀释，得 ETP 质量浓
130506-202004）均购自中国食品药品检定研究院；ETP- 度分别为 2 000、1 000、200、100、20、10、5、2 μg/mL，
D4（内标，同位素丰度99.00%，批号12-MRS-161-1）购自 IPM、MEM质量浓度分别均为1 000、500、100、50、10、5、
上海甄准生物科技有限公司；IPM-D4（内标，同位素丰 2.5、1 μg/mL 的混合系列标准工作液。同时，用稳定剂
度 99.50%，批号 7-MMH-92-2）、3-吗啉丙磺酸（3-mor‐ 配制ETP质量浓度为1 600、100、5 μg/mL，IPM、MEM质
pholinopropanesulfonic acid，MOPS）缓 冲 剂 购 自 美 国 量浓度分别均为 800、50、2.5 μg/mL 的混合质控样品溶
CFW公司；MEM-D6（内标，同位素丰度99.70%，批号5- 液。各标准品储备液于－80 ℃避光保存，系列标准工作
JUZ-42-1）购自谱析（上海）生物科技有限公司。甲醇、 液和混合质控样品溶液现配现用。
乙腈均购自美国Thermo Fisher Scientific公司；甲酸购自 2.2.3 内标溶液配制
上海安谱科学仪器有限公司；水为屈臣氏蒸馏水。 精密称取ETP-D4、IPM-D4、MEM-D6各1.00 mg，分
1.3 人血浆 别置于 5 mL 棕色容器中，加稳定剂溶解并定容，摇匀，
血浆为健康者未用药的空白血浆。本研究获天津 配制成 ETP-D4、IPM-D4、MEM-D6 质量浓度均为 200
医科大学一中心临床学院伦理委员会审批，伦理号为科 μg/mL的内标储备液。取适量储备液，加稳定剂稀释得
研20240124-1。 ETP-D4、IPM-D4、MEM-D6 质量浓度分别为 25、100、25
2 方法与结果 μg/mL的混合内标溶液，分装后于－80 ℃避光保存备用。
2.1 色谱与质谱条件 2.2.4 混合标准曲线样品和质控血浆样品的配制
色谱柱为 ACQUITY UPLC BEH C18 （2.1 mm×50 精密吸取180 μL空白血浆，置于1.5 mL离心管中，
mm，1.7 μm）；流动相 A 为 98% 水+2% 乙腈+0.1% 甲酸， 加入 ETP、IPM、MEM 混合系列标准工作液 20 μL，涡旋
流动相 B 为 98% 乙腈+2% 水+0.1% 甲酸，梯度洗脱（0～ 15 s 混匀，得 ETP 质量浓度为 200、100、20、10、2、1、0.5、
0.50 min，95%A；0.50～0.51 min，95%A→85%A；0.51～ 0.2 μg/mL，IPM、MEM质量浓度分别均为100、50、10、5、

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