Page 100 - 《中国药房》2024年3期

IPM、MEM 质量浓度分别均为 0.1、0.25、5、80 μg/mL 的 IPM 一致，但其信噪比和响应强度均不佳；304.14→
LLOQ 和低、中、高质量浓度的混合血浆标准样品，按 107.01 虽与 IPM 保留时间不一致，但其峰面积位于 IPM
“2.3”项下方法处理，每个质量浓度平行制备 5 份，连续 线性范围中段且线性范围良好。
3 d重复测定，根据随行标准曲线计算样品的实测浓度。 3.2 血浆样品与前处理方法的选择
ETP、IPM、MEM的LLOQ和低、中、高质量浓度的批内、 研究显示，与血清、柠檬酸盐乙二胺四乙酸血浆样
批间RE均≤5.14%、RSD均≤11.15%，详见表3。 品相比，肝素化血浆样品中 IPM 和 MEM 质量浓度超过
表3 ETP、IPM、MEM 在血浆中的批内及批间精密度 标称值的115%，低浓度尤其明显，故本实验血样采集选
[4]
和准确度（n＝5） 择柠檬酸盐乙二胺四乙酸抗凝管 。生物样品前处理方
法常用蛋白沉淀法、液-液萃取法、固相萃取法等，碳青
批内 批间
理论质量浓
药物 实测浓度/ 准确度 精密度 实测浓度/ 准确度 精密度 霉烯类抗生素较不稳定，简单、高效的前处理方法可最
度/（μg/mL）
（μg/mL） RE/% RSD/% （μg/mL） RE/% RSD/% 大限度地缩短样品周转时间，因此本实验选择了操作简
ETP 0.2 0.203 1.30 8.97 0.193 －3.47 9.13 单的蛋白沉淀法。本实验前处理中比较了以甲醇（分
0.5 0.505 1.04 1.72 0.501 0.19 6.28
10 10.293 2.93 3.49 10.265 2.65 10.03 别为 3∶1、4∶1、5∶1）和乙腈（分别为 2∶1、3∶1、4∶1）沉淀
160 160.895 0.56 2.80 163.482 2.18 6.72 血浆样品蛋白的6种方式。结果发现，乙腈沉淀血浆样
IPM 0.1 0.099 －0.80 9.41 0.103 2.53 8.19 品蛋白时，无论其比例如何，ETP 均出现裂峰，IPM、
0.25 0.253 1.20 6.23 0.253 1.01 6.36 MEM 出现不同程度的分峰或拖尾。以甲醇 3∶1 沉淀血
5 4.948 －1.04 5.88 4.844 －3.11 6.37
80 75.735 －5.33 4.08 77.937 －2.58 7.24 浆样品蛋白时，IPM分峰；以甲醇5∶1沉淀血浆样品蛋白
MEM 0.1 0.104 3.60 4.35 0.101 0.67 7.20 时，IPM 峰展宽，ETP 出现前沿峰；以甲醇 4∶1 沉淀血浆
0.25 0.253 1.28 3.13 0.256 2.37 5.96 样品蛋白时，ETP、IPM、MEM 峰形和响应强度均较好，
5 5.085 1.69 2.74 5.093 1.85 10.11
80 81.984 2.48 11.15 84.116 5.14 9.37 同时蛋白沉淀效果良好，故本研究最终选择甲醇4∶1沉
淀血浆样品蛋白。沉淀蛋白后上清液与流动相初始梯
2.4.5 稳定性
度极性相差较大，直接上样后ETP、IPM、MEM不同程度
待测物低、中、高3个质量浓度的混合质控样品溶液
地出现拖尾峰。为确保分析物峰形良好并降低基质效
与血浆混合后，分别在室温放置 4、8、12、24 h 和 4 ℃放
应，上样前应加水稀释上清液，且当上清液与水的比例
置 4、8、12、24 h 考察血浆样品短期稳定性，在－80 ℃冰
为1∶3时，化合物的峰形、线性范围、基质效应、提取回收
箱冻存60 d考察血浆样品长期稳定性；冻融循环3次考
率均良好。
察血浆样品冻融稳定性。血浆样品按“2.3”项下方法处
3.3 碳青霉烯类抗生素稳定性分析
理后置于处理进样器（8 ℃）和室温4、8、12、24 h，室温放置
碳青霉烯类抗生素，尤其是 IPM 在血浆中极不稳
4、8、12、24 h，考察处理后血浆样品稳定性。4 000 μg/mL [10]
定，并且会受到浓度与温度的影响 。兼性离子缓冲液
的ETP、IPM、MEM 标准品储备液分装，置于－80 ℃冻
可延缓碳青霉烯类抗生素的降解 [11―12] ，故本实验选择
存 60 d，考察储备液稳定性。RE 和 RSD 均＜15% 视为
0.2 mol/L MOPS 作为稳定剂。但是 MOPS 可能会损伤
稳定性良好。结果显示，ETP、IPM、MEM血浆样品在室
色谱柱，干扰方法稳定性，并且会增加检测成本 。所
[13]
温条件下分别可以稳定8、4、8 h，在4 ℃下分别可以稳定 以本实验只在保存样品与制备样品时加入稳定剂，不在
24、8、24 h，在－80 ℃冰箱冻存 60 d、冻融循环 3 次稳定
流动相中加入稳定剂。此外，β-内酰胺类抗生素环状结
性良好。ETP、IPM、MEM 血浆样品处理后在进样器 构对 pH 敏感，当 pH＞6 时，会产生降解，且碱性越强降
（8 ℃）中分别可以稳定24、4、24 h，室温条件下分别可以 解越快。因此，本实验在流动相的水相和有机相中加入
稳定8、4、8 h。ETP、IPM、MEM标准品储备液在－80 ℃ 0.1% 甲酸调节 pH，使流动相 pH 为酸性，同时避免碱性
冰箱冻存60 d可以保持稳定。 物质加入，减少药物降解 。
[14]
3 讨论 临床上若对碳青霉烯类抗生素进行治疗药物监测，
3.1 内标物质的选择 应重视取血到上机分析时的保存条件和温度。此外，本
稳定性同位素内标是 UPLC-MS/MS 定量分析方法 实验发现，将IPM置于4 ℃保存12 h或冻融循环3次后，
的首选，本实验选择 ETP-D4、IPM-D4、MEM-D6 这 3 种 仅高浓度组不满足稳定性要求（RE＞15%）。以往研究
同位素内标，分别与3种待测物ETP、IPM、MEM一一对 表明，更高的温度与药物浓度会导致IPM注射液稳定性
应。同位素内标与待测物的理化性质完全一致，不仅可 降低，故临床上检测 IPM 血药浓度应倾向选择稳态谷
以消除仪器进样的误差，还在最大程度上消除了基质效 浓度 。
[10]
应。本实验根据调谐结果分别比较了 4 对 IPM-D4 离 3.4 IPM双峰现象
子 对（304.14→107.01、304.14→141.98、304.07→97.91、 IPM 已被证明在水溶液中存在顺式和反式两种形
[4]
304.07→106.96）的质谱监测参数和响应强度。结果显 式的构象异构体 。IPM的两种构象异构体处于平衡状
示，304.14→141.98、304.07→97.91 这 2 组保留时间与 态，可以通过 UPLC 分离 [15―16] 。本实验中 IPM 以稳定的

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