Page 65 - 《中国药房》2024年2期

were determined in renal cortex. RESULTS Compared with the model group， the symptoms such as renal cortical hyperplasia，
vacuoles， infiltration of inflammatory cells， and renal cortical fibrosis had been improved in GBE low-dose and high-dose groups；
body weight， serum level of IL-10， the expression of Arg-1 in the renal cortex were significantly higher than model group （P＜
0.01）； fasting blood glucose， 24-hour food intake， 24-hour urine output， serum levels of MCP-1， IL-12， BUN， Scr and AGEs，
the ratio of bilateral kidneys to body weight， renal injury score， the proportion of renal interstitial fibrosis， the protein expressions
of iNOS， RAGE， RhoA and ROCK1 （except for GBE low-dose group） in renal cortex were significantly lower than model group
（P＜0.01）. CONCLUSIONS GBE could improve kidney damage and alleviate inflammatory response in DN model mice， the
mechanism of which may be related to inhibiting the AGEs-RAGE/RhoA/ROCK signaling pathway and regulating macrophage
polarization.
KEYWORDS Ginkgo biloba extract； diabetic nephropathy； inflammation； macrophage polarization； AGEs-RAGE/RhoA/ROCK
signaling pathway

糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病 family member A，RhoA）/Rho 相关螺旋卷曲蛋白激酶
（diabetes mellitus，DM）患者常见且难治的慢性微血管 （Rho-associated coiled-coil forming protein kinase，
并发症，是终末期肾病（end-stage renal disease，ESRD）的 ROCK）信号通路是促进巨噬细胞从M2型向M1型转化
[1]
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主要病因 。研究显示，DN与炎症反应和巨噬细胞极化 的核心环节 。本课题组前期研究发现，通过干预巨噬
密切相关，其中糖代谢异常是其炎症发病机制之一；持 细胞极化而抑制炎症可能是延缓 DN 进展的有效途
续高血糖可导致晚期糖基化终末产物（advanced glyca‐ 径 [10―11] 。考虑到 AGEs-RAGE/RhoA/ROCK 信号通路与
[12]
tion end products，AGEs）形成，而AGEs是DN发生、发展 DN的发生发展密切相关 ，故本研究拟通过建立DN小
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的关键物质 。巨噬细胞与 DM 模型动物高血糖水平、 鼠模型，观察 GBE 对其巨噬细胞极化和肾脏炎症的影
肾小球免疫复合物沉积及进行性纤维化、趋化因子增加 响 ，并 分 析 其 机 制 是 否 与 抑 制 AGEs-RAGE/RhoA/
密切相关：一方面，M1型巨噬细胞可通过分泌促炎因子 ROCK信号通路有关，以期为DN的防治提供实验依据。
[白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、诱导型一氧化氮 1 材料
合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）等]而促进炎 1.1 主要仪器
[3]
症反应，引起肾固有细胞损伤 ；另一方面，M2型巨噬细 本研究所用主要仪器包括Synergy HT型酶标仪（美
胞则可通过分泌大量抗炎因子[IL-10、精氨酸酶 1（argi‐ 国Bio-Tek公司）、Contour TS型血糖仪（德国Bayer Vital
nase-1，Arg-1）等]来抑制炎症反应，从而发挥促进损伤 GmbH）、Ti 型 倒 置 荧 光 显 微 镜（日 本 Nikon 公 司）、
组织修复重建的作用 。 CKX31型光学显微镜（日本Olympus公司）等。
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银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract，GBE）是从银 1.2 主要药品与试剂
杏叶中提取的活性物质，以银杏黄酮类、银杏内酯类为 GBE 片[批号 4380420，规格为每片含 GBE 40 mg
主要活性成分，具有抗氧化、抗血小板聚集、抗血栓、改 （总 黄 酮 醇 苷 9.6 mg、萜 类 内 酯 2.4 mg）] 购 自 德 国
善血液循环等活性。研究指出，GBE能降低DM模型大 Dr. Willimar Schwabe GmbH & Co. KG；盐酸二甲双胍片
鼠的血糖，减少炎症因子的分泌和细胞外基质的堆积， （批号 ABV0983，规格 0.5 g）购自中美上海施贵宝制药
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改善肾损伤 ；可通过蛋白激酶 B/哺乳动物雷帕霉素靶 有限公司；血糖试纸（批号201807）购自拜耳医药（上海）
蛋白信号通路来预防肾纤维化，从而延缓 DN 的发生发 有限公司；血肌酐（serum creatinine，Scr）检测试剂盒（批
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展 ；能减少DN模型小鼠的蛋白尿，减轻肾小管损伤，抑 号 20191008）购自南京建成生物工程研究所；小鼠单核
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制内质网应激，从而改善其肾功能 。可见，GBE有一定 细 胞 趋 化 蛋 白 1（monocyte chemoattractant protein-1，
的肾脏保护活性。 MCP-1）、IL-10、IL-12、血尿素氮（blood urea nitrogen，
据国内外研究报道，AGEs-晚期糖基化终末产物受 BUN）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号分别为
体（the receptor of advanced glycation end products， 202002、202009、202005、202010）均购自上海酶联生物
RAGE）轴参与了巨噬细胞极化的调控过程，可上调 M1 科技有限公司；AGEs ELISA 试剂盒（批号 202008）购自
巨噬细胞标志分子 IL-6、IL-1β、肿瘤细胞坏死因子 α、 南京翼飞雪生物科技有限公司；兔 β-肌动蛋白（β-actin）
iNOS、CD11c、CD86的表达，下调M2型巨噬细胞标志分 单克隆抗体（批号 AP0060）购自美国 Bioworld 公司；兔
子 IL-10、Arg-1、CD206 的表达，从而介导 DM 血管病 iNOS 多克隆抗体、山羊 Arg-1 多克隆抗体、兔 RAGE 多
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变 。此外，Ras同源基因家族成员A（Ras homolog gene 克隆抗体、兔RhoA单克隆抗体、兔重组ROCK1+ROCK2

中国药房 2024年第35卷第2期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 2 · 187 ·