Page 60 - 《中国药房》2024年2期

与 Lamin B1 蛋白的灰度值比值表示 Nrf2 蛋白的表达 3.3 低氧条件下 GW501516 对 PAECs 的凋亡率、细胞
水平。 活力、LDH活性和ROS水平的影响
2.4.3 PAECs 中 SOD、GPx、CAT、MDA、ROS 水 平 的 与对照组比较，低氧组PAECs的凋亡率、LDH活性、
检测 ROS 水平均显著升高（P＜0.05），细胞活力显著降低

采 用 ELISA 法 检 测 PAECs 中 SOD、GPx、CAT、 （P＜0.05）；与低氧组比较，NAC干预组和GW501516干
MDA水平；采用DCFH-DA探针联合荧光酶标仪测定细 预组细胞凋亡率、LDH活性、ROS水平均显著降低（P＜
5
胞中 ROS 水平。细胞以 1.5×10 个/孔均匀接种于 6 孔 0.05），细 胞 活 力 均 显 著 升 高（P＜0.05）。 结 果 见 图
板，每组设6个复孔。按“2.4.1”项下方法分组及给药后， 2、表1。
按试剂盒说明书检测 PAECs 中 SOD、GPx、CAT、MDA 10 6.8 10 6.8
10 6 10 6
水平；细胞中ROS水平的检测方法同“2.3.5”。
2.4.4 PAECs 的 凋 亡 率 、细 胞 活 力 、LDH 活 性 和 C- 10 5 10 5
PI-H PI-H
caspase-3蛋白表达水平的检测 10 4 10 4
按“2.4.1”项下方法分组及给药后，按“2.3.2”项下方 10 3 10 3
法检测细胞凋亡率；按“2.1.2”项下方法检测细胞活力； 10 2.3 10 10 10 10 10 10 7.7 10 2.3 10 10 10 10 10 10 7.7
6
7
6
5
4
3.7
5
7
3.7
4
FITC-H FITC-H
按“2.3.4”项下方法检测 LDH 活性；按“2.2.2”项下方 A.对照组 B.低氧组
10 6.8 10 6.8
法检测 C-caspase-3 蛋白表达水平，其中 C-caspase-3 一
10 6 10 6
抗稀释比例为1∶1 000，以C-caspase-3与GAPDH条带灰
10 5 10 5
度值的比值表示C-caspase-3蛋白的表达水平。 PI-H PI-H
2.5 统计学方法 10 4 10 4
采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析。计量数 10 3 10 3
10 2.3 10 2.3
据以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间 10 10 10 10 10 10 7.7 10 10 10 10 10 10 7.7
4
3.7
7
6
4
6
7
3.7
5
5
FITC-H FITC-H
两两比较采用LSD检验。检验水准α＝0.05。 C. NAC干预组 D. GW501516干预组
图2 各组细胞的凋亡流式图
3 结果
表1 低氧条件下 PAECs 的凋亡率、细胞活力、LDH 活
3.1 GW501516对PAECs的细胞毒性
性和ROS水平的检测结果（x±s）
GW501516 组 PAECs 孵育 12、24、48 h 后的细胞相
组别 细胞凋亡率（n＝3）/% 细胞活力（n＝6）/% LDH活性（n＝6） ROS水平（n＝6）
对存活率[（98.37±2.14）%、（102.10±4.61）%、（103.24± 对照组 6.03±1.34 100.00±5.67 1.00±0.12 1.00±0.15
3.66）%]与对照组PAECs孵育12、24、48 h后的细胞相对 低氧组 20.42±4.47 a 70.91±5.23 a 6.26±0.51 a 8.85±0.96 a
NAC干预组 13.55±2.06 b 85.13±4.25 b 3.32±0.23 b 2.14±0.38 b
存活率[（100.00±2.68）%、（100.00±3.75）%、（100.00± GW501516干预组 11.37±1.85 b 88.86±5.92 b 2.14±0.27 b 3.81±0.27 b
4.23）%]比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。 a：与对照组比较，P＜0.05；b：与低氧组比较，P＜0.05。
3.2 低氧条件下 GW501516 对 PAECs 中 PPARδ 蛋白 3.4 GW501516对低氧致PAECs损伤的作用机制
表达水平的影响 3.4.1 PAECs中HO-1蛋白和细胞核内Nrf2蛋白表达水
与对照组比较，低氧组PAECs中PPARδ蛋白表达水 平的检测结果
平显著降低（P＜0.05）；与低氧组比较，GW501516 干预 与对照组比较，低氧组 PAECs 中 HO-1 蛋白和细胞
组 PAECs 中 PPARδ 蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。 核内 Nrf2 蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）；与低氧
结果见图1。 组比较，DMF干预组和GW501516干预组PAECs中HO-
2.0 1 蛋白和细胞核内 Nrf2 蛋白表达水平均显著升高（P＜
b
PPARδ/GAPDH 1.0 预组PAECs中HO-1蛋白和细胞核内Nrf2蛋白表达水平
1.5
PPARδ 50 kDa 0.05）；与 GW501516 干预组比较，GW501516+ML385 干
GAPDH 37 kDa 0.5 a
0 均显著降低（P＜0.05）。结果见图3。
对照组 低氧组 GW501516 对照组 低氧组 GW501516
干预组 干预组 3.4.2 PAECs 中 SOD、GPx、CAT、MDA、ROS 水平的检
A. PPARδ蛋白表达电泳图 B. PPARδ蛋白表达柱状图（n＝3）
测结果
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与低氧组比较，P＜0.05。
图1 低氧条件下 GW501516 对 PAECs 中 PPARδ 蛋白 与对照组比较，低氧组PAECs中SOD、GPx、CAT水
表达的影响 平均显著降低（P＜0.05），MDA、ROS 水平均显著升高
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